论文部分内容阅读
目的:肉桂醛影响实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠炎症反应的研究。初步探讨肉桂醛对EAE模型小胶质细胞以及TNF-α、IL-1β、IL-6等炎症因子表达的影响,为进一步探讨多发性硬化的发病机制及治疗方法提供有意义的基础实验结果。方法:将60只体重18-22g的8-10周雌性C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组,EAE组,肉桂醛组(50mg/kg)和地塞米松组(0.07mg/kg),每组15只。以MOG35-55为抗原免疫C57BL/6小鼠建立EAE动物模型。用生理盐水将抗原MOG35-55稀释成为10mg/ml的液体状态,然后加入结核杆菌H37Ra(终浓度4mg/ml),最后将完全弗氏佐剂按1:1的体积加入并混合均匀,充分乳化后按每只0.1ml在小鼠脊柱两侧的皮肤下分四点注射,免疫后的当天即第0h及第48h腹腔内注射500ng百日咳毒素(Pertussis toxin,PTX)(1000ng/只)。自EAE免疫当天(记为0天),肉桂醛组的小鼠给予肉桂醛药物50mg/kg每隔一日腹腔注射;地塞米松组的小鼠给予地塞米松药物0.07mg/kg每隔一日腹腔注射;正常对照组的小鼠及EAE组的小鼠给予等量的0.9%氯化钠二甲基亚砜溶液每隔一日腹腔注射。于动物免疫当日及免疫后每日上午8:00时和下午16:00时对动物体重、活动状况、精神状态、皮毛光泽度进行观察,并对动物进行神经功能评分。免疫当天记为0天,取第20天(发病高峰期)为时间点,比较各组小鼠的发病率、发病时间、体重以及神经功能评分,并处死小鼠,留取标本。用HE染色法观察小鼠脊髓腰膨大炎细胞浸润情况;用免疫荧光染色法观察小鼠脑组织内的小胶质细胞;用ELISA法测定小鼠外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;用PCR测定小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的转录情况。结果:1各组小鼠发病率和发病时间的比较:自免疫后起,除正常对照组外,其余各组小鼠不同程度出现肢体瘫痪、食欲下降、精神不振、皮毛暗淡无光泽,甚至有溃疡形成。EAE组小鼠的发病率(100%)明显高于肉桂醛组小鼠的发病率(46.7%)和地塞米松组小鼠的发病率(40%),差异有统计学意义(P<0.01)。EAE组小鼠的发病时间(12.87±0.99天)明显早于肉桂醛组小鼠的发病时间(16.38±1.77天)和地塞米松组小鼠的发病时间(17.29±1.60天),差异有统计学意义(P<0.01)。2各组小鼠体重变化:正常对照组、EAE组、肉桂醛组与地塞米松组小鼠在发病高峰期时体重均数分别为:21.43±1.07g、17.53±1.00g、20.11±1.45g、21.45±1.05g,正常对照组、肉桂醛组与地塞米松组小鼠平均体重明显高于EAE组小鼠,差异有统计学意义(P<0.01)。3行为学观察:正常对照组、EAE组、肉桂醛组与地塞米松组小鼠在发病高峰期时神经功能评分均数分别为:0分、2.67±0.56分、1.44±0.56分、1.36±0.69分,肉桂醛组与地塞米松组小鼠神经功能评分明显低于EAE组小鼠神经功能评分,差异有统计学意义(P<0.01)。4各组小鼠脊髓炎细胞浸润程度观察:正常对照组小鼠脊髓无明显炎细胞浸润,且髓鞘保存完好整齐。EAE组小鼠脊髓腰膨大白质内出现不同程度的炎细胞浸润和脱髓鞘;肉桂醛组和地塞米松组与EAE组相比,其炎性病灶和脱髓鞘区域均有所缩小。5各组小鼠脑组织中小胶质细胞的观察:正常对照组小鼠脑组织内大部分小胶质细胞处于静息状态;EAE组小鼠脑组织内处于激活态的小胶质细胞明显多于肉桂醛组和地塞米松组。6外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量:在高峰期,正常对照组外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的平均含量分别为:33.80±19.25 pg/ml、21.03±9.47pg/ml、13.02±6.28pg/ml。EAE组外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的平均含量分别为:49.71±5.36 pg/ml、31.66±11.40 pg/ml、63.54±26.06pg/ml。肉桂醛组外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的平均含量分别为:29.53±8.20 pg/ml、21.97±4.97 pg/ml、41.83±20.42 pg/ml。地塞米松组外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的平均含量分别为:19.97±19.09 pg/ml、16.54±3.69 pg/ml、37.37±20.88 pg/ml。正常对照组、肉桂醛组与地塞米松组小鼠外周血中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量低于EAE组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。7脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的转录情况:正常对照组组在高峰期脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的平均含量分别为:1.23±0.99、0.24±0.02、0.86±0.20。EAE组在高峰期脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的平均含量分别为:27.42±16.65、6.96±0.95、1.88±0.61。肉桂醛组在高峰期脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的平均含量分别为:2.61±1.38、1.54±0.44、0.59±0.18。地塞米松组在高峰期脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的平均含量分别为:0.96±0.17、1.11±0.10、0.88±0.22。正常对照组、肉桂醛组与地塞米松组小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA的转录均少于EAE组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1肉桂醛能够降低EAE小鼠的发病率,推迟小鼠的发病时间,减轻小鼠神经功能缺损程度。2肉桂醛能够减轻EAE小鼠脊髓的炎细胞浸润程度,抑制中枢神经系统中小胶质细胞激活。3肉桂醛能够降低EAE小鼠外周和中枢神经系统中TNF-α、IL-1β和IL-6的水平。