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本研究采用分子生物学方法对分枝杆菌武汉临床分离株进行菌种鉴定；运用DNA测序法，对结核分枝杆菌（Mtb）的利福平（RIF）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）等四种重要的一线抗结核药物耐药基因决定区和突变热点区的耐药分子特征进行分析。从武汉地区共收集104例分枝杆菌分离株，经PCR扩增和经16S rDNA基因序列比对显示，其中85株均为Mtb（81.7%），而19株临床诊断为“非结核分枝杆菌”菌株中，7株属于龟脓肿分枝杆菌复合群（6.8%），4株属于鸟分枝杆菌复合群（3.8%），另外8株却被鉴定为非分枝杆菌（7.7%），其中7株属于戈登氏菌属，另外1株属于诺卡氏菌属。85例Mtb分离株包括：对一线抗结核药物全敏感菌株20例，耐药株65例。对所有Mtb菌株的rpoB、katG、inhA、ahpC、rpsL、rrs和embB基因以及inhA调节区和oxyR-ahpC间隔区序列突变热点区进行测序分析。91.7%（55/60）的耐RIF菌株在rpoB基因的耐药决定区检测到了突变，531、526和516位点为常见突变位点，其突变率分别为：51.7%、18.3%和10.0%。此外，8株检测到了双突变，同时发现了3种新突变。68.8%（44/64）耐INH菌株的katG检测到了突变，katG315突变率最高，还发现了5种新的突变类型；inhA结构基因未检测到突变，仅有一株ahpC结构基因检测到了突变；8株在inhA启动子区发生突变，6株在oxyR-ahpC间隔区发生突变；10株耐INH菌株在上述5个片段中未检测到突变。耐SM株有75.6%检测到rpsL突变，主要集中在第43位（62.2%）和88位密码子（13.3%），并发现了一个新的突变类型，40.0%的SM耐药株rrs基因发生了突变，1株全敏感菌株的rrs基因也检测到了突变。22例EMB耐药株共有54.5%的embB检测到了突变，主要为embB306突变，EMB敏感株也发现了embB306的突变。本研究表明，武汉地区所分离的分枝杆菌主要为Mtb，同时也有NTM和非分枝杆菌，提示对肺部感染的病人，必须对所分离的菌株进行菌种鉴定。实验表明，武汉地区Mtb对RIF、INH和SM耐药确与rpoB、katG和rpsL基因突变有关，但embB306位突变可能不是EMB耐药的直接原因。并且所研究的基因突变类型和突变率也存在地区差异，实验不仅检测到了新的突变类型，还发现一些耐药菌株的耐药基因并未发生突变，这表明Mtb的耐药机制仍有待更深入的研究。