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家蚕是重要的经济昆虫之一,家蚕饲养已有5000多年的历史。人类饲养家蚕的目的是为了得到优质高产的茧丝。家蚕的遗传学及其应用研究已有近百年的历史,因此对家蚕的遗传研究已积累了较为丰富的经验,并收集了大量的家蚕品种资源。家蚕的遗传学研究促进了家蚕育种的发展,传统的育种方法对提高和改良已有的家蚕品种,需要投入大量的人力、物力以及育种者丰富的实践经验。六十年代提出了家蚕的“成对育种”方法,即将较好组合的对交的品种分别定向选育,在选育到F5—F6时再组合测试,到F11—F13即可育成。“成对育种”方法在一定程度上提高了家蚕常规育种的选择效率。蚕茧的茧层率从土种的10%左右提高到现在的25%左右,显著提高了蚕茧的生产效率。但是,传统的品种选育方法,只能从表型上选择,而不能从基因型、分子水平上选择。表型是基因型与环境共同作用的结果,各世代选择培育的环境条件又不可能完全一致,因此同一基因型的表现型在各世代也不完全相同,所以在常规育种中需要饲育大量的蛾区,尽一切可能减少优良基因型的丢失。仅管如此,传统育种方法仍难免顾此失彼,要选育出最佳基因型组合的优良品种仍然十分困难,为此,育种学家们在传统育种的基础上不断探索新的育种方法。近年来,随着分子生物技术的应用和发展,提出了分子辅助育种(Marker-assisted selection,简称MAS),分子辅助育种便是可以弥补传统育种方法不足的一种育种新方法。因此,进行家蚕分子标记辅助选择育种具有十分重要的意义。进行分子标记辅助育种必须首先构建分子连锁遗传图谱以及开展数量性状基因的定位研究。本研究便是用生态型差异较大的家蚕基础品种和实用品种杂交构建家AAFLP分子连锁遗传图谱,探索构建家蚕AFLP分子连锁遗传图谱的方法以及家蚕重要经济性状的QTL研究。 1 家蚕AFLP分子连锁图谱构建 本研究选用生态型差异较大的两个家蚕品种:大造(P50)和C100(871),大造是构建家蚕连锁遗传图谱的常用品种,其茧质经济性状较差,茧色为绿色,由位于家蚕的第15染色体上的Gc基因独立支配。C100为西南农业大学家蚕遗传育种室保育的生产用品种871纯种,茧色为白色,茧质经济性状较优。随机抽取44个BC1世代个体,其中绿色茧和白色茧各22个,绿、白色茧中雌、雄各11个。 1.1 遗传连锁图谱构建一‘一一一一一一一,韶粤黔竺遥注 用%对AFLP选择性扩增引物,共扩增出8522位点,平均每对引物扩增s8位点;其中多态性位点4084个,平均每对引物扩增多态性位点43个,1744位点复合孟德尔遗传分离比1:l,平均每对引物18个位点。1744个位点符合l:l分离,经除去0位点后还有1 474位点。偏分离位点2431个,偏分离位比46.7%。诵、月.1、l! 1474个位点用Q刀伪190,e“i6n0.29X2003傲件分析后获得133个连锁群,327个位点未进连锁群,用标记数不少于10个的35个连锁群构建家蚕AFLP遗传连锁图谱.35个连锁群共有标记数806,总图距1 28%.加M,标记间最大图距47.7cM,最小图距2.3cM.35个连锁群平均图距16.7cM,连锁群最大平均图距23.IcM,最小平均图距10.6cM。35个连锁群中的标记数,最多为92个(第4连锁群),该连锁群总图距17S4cM,平均图距1729cM,最大图距233cM,最小图距ZJcM。LZ不同作图软件构图比较 用Q”。19和侧峨PM叭KER两种作国软件对759个标记进行构图·QTxblg软件构图结 一、果,除去216个0位点后的543个标记,共分成51个连锁群,其中33个标记未进连锁群,17个二联体,余下的476个标记构成34个连锁群。34个连锁群的总图距“02.7cM,476个有效识别位点标记,连锁群平均图距191.3cM,标记间平均图距14.7cM,标记间最大图距76.IcM,最小分辨图距23cM;平均图距小于10CM的连锁群有2个,平均图距大于20CM的连锁群有1个,其余31连锁群的平均图距介于1加M20cM间. MLA刊山U主R软件构图结果,共分成仍个连锁群,6个标记不能进入连锁群,23个二联体,22个三联体,‘其中558个标记构建33个连镇遗传图谱.33个连锁群,平均每群17个标记;总图距6320.2cM,连锁群平均图距191.scM,标记间平均图距17.IcM,标记间最大图距74.IcM,最小图距2.3cM:4似个有效识别位点标记,156个0位点标记(若计入156个0位点,则标记间平均图距12.加M);平均图距小于1 OCM的连锁群有3个,平均图距大于20CM的连锁群有4个,其余26连锁群的平均图距介于10cM20CM间。 在相同的标准条件(p司.001或LOD户3,间.20)下,分群数QTXblg软件构图的结果较MApM人KER软件构图的结果少44个群;最多标记连锁群标记数QTxb19软件构图结果(47)较MAPMAKER软件构图结果(37)较多10个标记:最多标记连锁群平均遗传图距QTXblg软件构图结果为15.7cM,MAPMAKER软件构图结果为182cM:两个构图软件构图结果总图 摘要巴巴巴巴里巴曰巴里曰巴曰巴里巴巴距相差不大,但总平均图距QTXb19软件构图较MAPMAKER构图软件小2.scM,且图上总标记数Q狱blg软件构图