小麦阿拉伯木聚寡糖对LPS诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症因子分泌的影响及作用机制

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我国是小麦生产大国,但小麦加工副产品尚未得到充分利用,资源浪费现象严重。近年来,国际对小麦加工副产品的研究愈加深入,产品广泛应用于各个行业,而我国在此方面尚有欠缺。小麦阿拉伯木聚糖(AX)在小麦麸皮中存在较为丰富,是小麦饲粮中非淀粉多糖(NSP)的主要组成部分,研究发现在小麦饲粮中添加木聚糖酶能够有效消除其抗营养作用,使AX在动物体内发挥益生元作用。大量研究表明,机体对小麦阿拉伯木聚糖与其降解产物阿拉伯木聚寡糖(AXOS)的利用机制不同,近年来,部分学者对AXOS的提取和制备开展了研究,发现AXOS能提高小鼠的机体免疫功能,但其作用机制尚不明确。关于小麦AXOS作为饲料添加剂的使用未见报道,其对猪的免疫功能影响也有待研究。巨噬细胞在机体中扮演非常重要的角色,其可塑性大,根据环境刺激的不同能够分化成不同种群,发挥不同作用。在受到刺激后,巨噬细胞大量分泌炎症因子以清除机体炎症,但炎症因子分泌量过大时对机体本身也会造成伤害,因此,促进炎症因子的适度分泌十分重要。本试验以猪肺泡巨噬细胞为研究对象,以脂多糖(LPS)诱导产生炎症模型,探讨小麦AXOS对巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其作用机制。试验一小麦AXOS对LPS诱导的巨噬细胞炎症因子及NF-κB基因表达的影响本试验旨在研究小麦阿拉伯木聚寡糖对LPS诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症因子分泌的影响及其可能的作用机制。本试验采用细胞体外培养方法,利用LPS构建体外猪肺泡巨噬细胞炎症模型,研究小麦阿拉伯木聚寡糖对巨噬细胞炎症因子和NF-κB基因表达的影响。试验分为3个处理,每处理3个重复,分别为:1)对照处理,无处理;2)LPS处理,0.1 μg/ml LPS刺激;3)LPS+AXOS处理,0.1 μg/ml LPS 刺激+不同浓度 AXOS(31.25、62.5、125、250 μg/ml),分别处理2h、4h、6h。结果表明:1)与LPS处理相比,小麦AXOS在31.25μg/ml和125μg/ml浓度处理4小时,62.5 μg/ml浓度处理6小时显著下调了 IL-6的含量(P<0.05);2)与LPS处理相比,250 μg/ml浓度处理2小时,125及250 μg/ml浓度处理4小时,各浓度处理6小时显著下降TNF-α含量(P<0.05);3)LPS+AXOS处理较LPS处理的IL-4含量显著下降(P<0.05);4)除31.25 μg/ml浓度外处理2小时,各浓度处理4小时,31.25 μg/ml及62.5 μg/ml浓度处理6小时显著下调IL-10的含量(P<0.05)。5)LPS+AXOS处理2小时,TNF-α的mRNA表达量显著低于 LPS 处理(P<0.05);6)LPS+AXOS 处理 4 小时,IL-10、TNF-α 的mRNA表达量显著下降(P<0.05);7)处理6小时,IL-10的mRNA表达量显著下降(P<0.05)。与LPS处理相比,LPS+AXOS处理的NF-κB p65表达量均显著上升(P<0.05)。结果提示,AXOS能够调节巨噬细胞的部分炎症因子分泌,且AXOS处理后NF-κB的mRNA表达量显著增加,推测其可能通过NF-κB发挥作用。试验二抑制NF-κB对小麦AXOS调节猪肺泡巨噬细胞炎症因子分泌的影响本试验旨在研究NF-κB信号通路在小麦AXOS调节LPS诱导的猪肺泡巨噬细胞炎症因子分泌过程中的作用,探索NF-κB信号通路参与小麦AXOS控制巨噬细胞炎症因子分泌的分子机制。本试验采用细胞体外培养方法,利用NF-κB通路抑制剂(BAY11-7082)建立抑制模型,研究NF-κB对小麦AXOS调节巨噬细胞炎症因子分泌的影响。试验分为3处理,每处理3个重复,分别为:1)对照处理,无处理;2)LPS处理,0.1 μg/ml LPS刺激;3)NF-κB抑制组,NF-κB抑制剂预处理1小时+0.1μg/ml LPS刺激+不同浓度(31.25、62.5、125、25μg/ml)AXOS分别处理2h、4h、6h。结果表明:1)抑制NF-κB信号通路后,与LPS相比LPS+AXOS处理IL-6、及TNF-α分泌水平无明显变化(P>0.05);2)抑制NF-κB信号通路后,与LPS处理相比,LPS+AXOS处理2小时除250μg/ml浓度外IL-4的分泌量均显著上升(P<0.05),但处理4小时和6小时时分泌量无显著变化(P>0.05);3)与LPS处理相比,LPS+AXOS处理在31.25μg/ml浓度处理2小时和4小时,62.5 μg/ml浓度水平处理2小时和4小时,125 μg/ml浓度处理2小时,IL-10的分泌量显著上升(P<0.05)。4)细胞因子的mRNA表达量结果表明,抑制NF-κB信号通路后,与LPS处理相比LPS+AXOS处理的IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α的mRNA表达量无显著变化(P>0.05);4)蛋白水平结果显示,LPS+AXOS处理较LPS处理NF-κB p65蛋白的表达显著降低(P<0.05),抑制组表达量较LPS处理也显著降低(P<0.05)。结果提示:AXOS可以通过NF-κB调节巨噬细胞部分炎症因子分泌。
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