【目的】利用氯化汞(HgCl2)进行选择性培养,从自然界的土壤中分离耐汞菌。从中筛选出可以高效还原无机汞离子的优良菌株进行研究,以实际应用于工业汞污水的处理和汞污染土壤和水体的修复。【方法】①耐汞菌株的分离:采集日光灯厂厂区汞污染的土壤,用常规方法在含HgCl2的培养基上培养,长出的单菌落进一步分离纯化、观察菌落的形态、革兰氏染色、细菌生化分类鉴定及抗生素耐药性分析;②耐汞水平测定:用含Hg2+浓度不同的培养液进行培养,观察菌株的生长情况;③高耐菌株生长能力的研究:包括观察菌株在含汞培养液中的生存趋势;在不同pH条件下的生长情况;在灭菌自来水及农田土中的生存能力;④高耐菌株对Hg2+的还原能力:将待测菌接种于含汞浓度不同的LB培养液中,培养48h后取上清,用双道原子荧光光度计测定残余的汞含量,得出汞还原率;⑤16SrRNA分类鉴定:提取待测菌的基因组DNA,根据细菌16SrRNA基因中的保守序列设计并合成引物,PCR扩增产物,测序结果通过BLASTN数据库及同源性比较分析而明确待测菌的分类鉴定。⑥merA基因片段的克隆和鉴定:根据Gene Bank数据库提供的已知的merA基因序列及同源性比较分析,在高度保守的DNA序列区设计PCR引物,对待测菌的基因组DNA进行扩增,测序结果通过BLASTN进行同源性比较分析,鉴定待测菌是否含有merA基因以及其与已知的merA基因的同源性。同时尝试将所扩增的基因片段转化合适的受体菌。