目的利用噬菌体肽库技术,制备人源化HIF1α喉癌单链抗体,检测抗体性能,并研究其对HEP2细胞放射敏感性的影响,为喉癌靶向治疗和放射增敏研究提供实验室数据。方法提取喉癌患者癌旁阳性淋巴结总RNA,通过RT-PCR和重叠延伸PCR(SOE-PCR)扩增得到可变区基因片段。将扩增片段重组到噬菌体载体pCANTAB5E中,转化至TG1大肠杆菌,以制备初级抗体库。先后以HEP2细胞及HIF1α纯化抗原对抗体库进行免疫亲和富集,制备HEP2细胞特异性HIF1α单链抗体scFv。SDS-PAGE电泳检测单链抗体scFv的可溶性表达,Western blot检测其对HIF1α蛋白表达的影响,ELISA和细胞免疫化学鉴定其特异性,CCK8检测scFv联合6MV-X线照射后HEP2细胞的存活率,克隆形成实验分析scFv处理后HEP2细胞放射线辐照存活曲线。结果成功制备HIF1α人喉癌单链抗体scFv;SDS-PAGE电泳证实其可溶性表达且分子量约为34 kDa;Western blot实验表明其能下调HEP2细胞中HIF1α蛋白的表达;ELISA实验检测到该抗体对HIF1α抗原的识别率为79%;细胞免疫化学显示该抗体与HEP2细胞特异性结合。CCK8检测结果显示scFv联合6MV-X线照射后,HEP2细胞存活率较单纯X线照射组明显降低(P<0.05);克隆形成实验结果显示scFv干预后,HEP2细胞对放射辐照的增敏比SER为1.89。结论成功构建了人源喉癌噬菌体单链抗体库,并筛选出能与HIF1α蛋白特异性结合的单链抗体,且其能增加HEP2细胞对放射线的敏感性,为喉癌的靶向治疗和放射增敏研究提供了新的思路。