【摘 要】
:
存在于食物中的李斯特菌(L.monocytogenes)引起的侵入性感染时常发生,婴儿和孕妇等免疫功能低下人群感染后一般会导致败血症和脑膜脑炎。相较于其他食源性致病菌,李斯特菌致病程度更严重,在某些暴发期间致死率接近30%。因此,李斯特菌的灵敏、特异和快速检测对于确保食品安全和公众健康至关重要。细菌检测的金标准是平板菌落培养计数法,但这种方法既耗时又费力。传统方法的局限性促进了各种新兴病原菌检测技
【基金项目】
:
广州市科技计划项目(201903010034);
论文部分内容阅读
存在于食物中的李斯特菌(L.monocytogenes)引起的侵入性感染时常发生,婴儿和孕妇等免疫功能低下人群感染后一般会导致败血症和脑膜脑炎。相较于其他食源性致病菌,李斯特菌致病程度更严重,在某些暴发期间致死率接近30%。因此,李斯特菌的灵敏、特异和快速检测对于确保食品安全和公众健康至关重要。细菌检测的金标准是平板菌落培养计数法,但这种方法既耗时又费力。传统方法的局限性促进了各种新兴病原菌检测技术和方法的发展,其中,荧光生物传感方法由于其定量性质和快速响应在检测李斯特菌中呈现出巨大的应用潜力。在本文中,首先培养目标致病菌并制备其免疫原,接着分别免疫豚鼠和新西兰大白兔,获得识别元件——抗李斯特菌抗体。接着通过正辛酸和饱和硫酸铵梯度盐析法纯化血清和获得特异性抗体,利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和BCA蛋白检测试剂盒鉴定抗体的纯度和相对分子质量,并采用酶联免疫吸附实验和FITC免疫荧光染色实验分析抗体的效价和特异性。第二步,合成超小顺磁性且在水溶液中分散性好的Fe3O4磁性纳米粒子(Fe3O4 NPs)和具有长波荧光发射的CdZnTe量子点(CdZnTe QDs)。将制备的豚鼠抗体通过静电作用结合到磁性纳米粒子上形成豚鼠抗体-磁性纳米粒子生物复合物(Fe3O4 NPs/pAb1);兔抗与CdZnTe量子点间通过酰胺键形成兔抗-CdZnTe量子点的生物共轭物(CdZnTe QDs/pAb2)。第三步,基于豚鼠抗体功能化的磁性纳米粒子和兔抗锚定的CdZnTe量子点设计一种用于检测痕量李斯特菌的荧光免疫传感方法。Fe3O4NPs/pAb1作为免疫磁分离器针对性捕获目标菌,CdZnTe QDs/pAb2作为特异性信号指示剂,磁分离器、信号指示剂和目标菌在抗原-抗体间作用力下形成稳定的夹心模式,最后通过荧光信号检测进行李斯特菌的定量分析。本文的研究结果表明:通过分析SDS-PAGE电泳图得到抗体的纯度相较于未纯化前有了显著提高,兔和豚鼠抗体效价分别超过1:256000和1:64 000。所制备的兔抗和豚鼠抗体具有效价高、特异性好和灵敏度高等特点。优化检测条件后,所提出的荧光免疫传感方法对李斯特菌的特异性检测具有1至109 CFU mL-1的宽检测范围和1 CFU mL-1的低检测限(LOD),实现了对李斯特菌异常灵敏的检测。李斯特菌在水和巴氏杀菌牛奶样品中的加标回收率在91-111%(RSD<4.39%)的可接受范围内。同时,该免疫传感方法对目标菌的检测耗时60 min,实现了复杂样品中的快速准确测定。此外,由于具有长波荧光发射的CdZnTe QDs/pAb2的指示和超小的顺磁性Fe3O4 NPs/pAb1的磁分离,所构建的免疫传感策略对生物基质具有优异的抗干扰性能。综上所述,高灵敏性、强特异性和较好抗干扰性的免疫传感方法在痕量李斯特菌测定中显示出巨大的潜力。有意义的是,本工作提出的免疫传感策略具有普适性,通过简单地替换特异性抗体即可用于其他食源性病原体检测。最后对全文总结如下:1.基于免疫磁分离和抗体修饰的长波荧光发射的CdZnTe量子点指示剂构建了免疫分析策略。2.该荧光免疫传感方法具有操作简单、耗时少、灵敏度高、对生物基质抗干扰性能优异等优点。3.本工作提出的免疫分析策略具有普遍适用性,可通过简单地替换特异性抗体,应用于其他食源性病原体检测。4.在实际应用中显示出检测李斯特菌的巨大潜力,对控制食源性疾病的爆发具有重要意义。
其他文献
近三十年来,超分子化学因其独特性质进入了人们视野,并发展出了不同于传统聚合物的性能优异的超分子聚合物。由于其含有动态可逆的自组装结构,超分子聚合物能够对外部环境刺激(热、光、p H等)作出响应,为开发新一代智能型功能材料创造了更多可能,尤其是制备自修复材料。目前,脲基嘧啶酮(UPy)四重氢键体系因其具有极高的结合常数成为了研究最广泛的超分子体系。本文通过精心设计将UPy四重氢键动态可逆交联网络引进
黑豆皮花色苷(Black soybean peel anthocyanin,BAC)具有显著的生理活性,其中矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-glucoside,C3G)是主要的花色苷。但花色苷结构不稳定,对外部环境敏感,容易降解,并且花色苷进入人体后的生物利用度较低。将递送系统应用于负载花色苷能提高其稳定性,并最大限度地减少花色苷与环境因素的直接接触,有利于花色苷在食品中的进一步
有机发光二极管(OLED)由于低功耗和制造工艺简单等优良的特性而备受人们的关注,在显示和照明应用方面显示出非凡的潜力,并已广泛应用于智能手机。然而,尽管到目前为止OLED显示技术已经取得了巨大的进展,但商业化的磷光OLED仍然存在效率低和效率滚降大等问题。而在OLED器件中,主体材料的选择对获得高效的器件效率具有十分重要的作用。要获得高效率和低效率滚降的器件,主体材料不仅要有与发光材料以及空穴和电
近年来以“两康”为代表的一系列财务造假案件不仅严重破坏了上市公司质量,还透支人们对市场信息的信任度,不利于资本市场长远和良性的发展。鉴于我国上市公司财务造假现象不仅屡禁不止还频繁被曝光的现状,2021年证监会牵头成立打击资本市场违法活动工作小组,提出要强化要案惩治,对财务造假进行精准打击,持续净化市场生态。在此背景下,对最新发生的典型造假案例做深入的分析,以完善识别与防范财务造假体系,为利益相关方
低温燃料电池(Low temperature fuel cells,LTFCs)作为高效直接化学能到电能转换的替代能源转换装置引起了相当大的兴趣,具有高效、清洁、能量转化率高,便携性高等优点,被视为是未来世界能量使用方式的最终形态。其广泛使用的“燃料”:氢能,是一种十分清洁的二次能源,可以通过光解、电解等方式合成,合成方式简单,且不产生其他相关的污染物。然而,阴极缓慢的氧还原反应(Oxygen r
随着社会经济的不断发展,人民生活水平日益提高,广大患者对就医体验的要求也不断提高。与此同时,随着信息技术的飞速发展,公众号、APP、智能手机、自助机等互联网工具在就医过程中的广泛应用,传统的收费方式已经不能满足患者当前的就医需求,怎样指导患者快速就医,获得更加良好的就医感受,这就给各大医院提出了更高的要求。随着医疗卫生领域“以患者为中心”改革的不断深入,推广建立智慧型医院,完善线上、线下的诊疗流程
随着能源需求的不断增长和环境问题的日益恶化,利用可再生能源替代化石燃料已成为全球能源经济的紧迫而必然的趋势。核心技术之一是开发先进的能量转换系统。传统三维金属有机框架材料因为金属中心与绝缘的有机配体之间的阻碍,导致其导电性低下,使材料的氧化还原中心利用率低,反应动力学缓慢,限制其在电化学系统中的应用。二维共轭金属有机框架材料(2D c-MOF),由于平面内的p-π共轭,使其具有较好的导电性,此外,
随着我国医疗卫生市场竞争的日渐激烈化,公立医院为了迎合信息化、网络化以及多样化支付的现代化诉求,对自身的收费管理流程进行改造和升级可谓势在必行。对公立医院而言,其必须对内部人员结构进行优化完善,实现收费业务的一体化管理,落地智慧医院的多点支付服务,在不断强化专业岗位培训的过程中,便于患者能够直接在窗口当中,享受“一条龙”服务,在有效分流候诊人群的基础上,提高医院的患者接待能力以及广大患者的满意度。
2014年发生的“11超日债”作为第一起实质性违约事件,打破了我国债券的隐性刚兑。到2021年违约规模大幅提高,违约债券总计达200只,总金额达到1700亿元。通过分析债券违约成因发现,企业经营不善是导致债券违约的关键因素。当发生债券违约事件时,市场、企业、投资人以及监管机构等必然会受到诸多负面影响。一方面这些负面影响会促使企业进行资本操纵,引发重大错报风险,另一方面债券违约环境下也会使审计师行业
新经济时代背景下,信息披露在证券市场中发挥着重要的作用,注册会计师和事务所作为会计信息使用主体与证券市场间之间的中立第三方,在会计信息公示中始终扮演着极为关键的角色。证监会等、中注协等部门作为管控事务所和会计师的主要监管部门,对其合规运营负有主要责任。虽然目前已实施了新的审计质量控制规则,但却尚未完全遏制财务舞弊案件频发:例如瑞幸咖啡案、康得新案等。尽管证监会采取了程度各异的处罚措施,注册会计师及