人类抗原处理相关转运体基因克隆及其在肿瘤细胞系的表达

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhang504752895
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该研究克隆了人TAP基因并将其转染表达下调的肿瘤细胞,研究其在MHC Ⅰ类分子抗原递呈途径中的作用,探讨其在抗肿瘤免疫治疗中应用的意义.方法:以EB病毒刺激的人类B淋巴母细胞系(B lymphoblastoid cell lines,B-LCLs)为实验材料,利用TRⅠzol试剂提取总RNA,将总RNA反转录为cDNA第一链.以cDNA为模板,根据人类TAP1及TAP2基因的cDNA序列设计引物,扩增TAP1、TAP2特异性片段.将TAP1、TAP2 cDNA片段分别与表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO连接,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/V5-His-TOPO-TAP1和pcDNA3.1/V5-His-TOPO-TAP2,转化大肠杆菌TOP10,经过氨苄青霉素抗性筛选和PCR鉴定后进行测序分析.用ConcertTM high purity plasmid miniprep system提取测序菌液重的重组质粒,将其转染表达下调的肺腺癌细胞系Anip973,通过RT-PCR,斑点杂交检测TAP1、TAP2 mRNA及蛋白水平,用流式细胞仪检测细胞表面MHC Ⅰ类分子的表达.结论:该研究成功的克隆了人类TAP1及TAP2基因并构建了重组真核表达质粒,将其分别转染TAP表达下调的肺腺癌细胞系Anip973,可提高TAP1、TAP2的表达水平及细胞表面MHC Ⅰ类分子的表达,证明TAP基因转染可恢复肿瘤细胞的抗原递呈能力,使TAP基因成为肿瘤基因治疗的一个新靶点.
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