表达猪圆环病毒2型Cap蛋白重组新城疫病毒的构建及其生物学特性的研究

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猪圆环病毒2型(PCV2)属于圆环病毒科、圆环病毒属,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、皮炎肾病综合征(PDNS)和母猪繁殖障碍等症状的主要病原物,所有这些症状被统称为猪圆环病毒相关病(PCVAD)。自1991年PMWS在加拿大被首次报道至今,该病目前已经遍布世界各地,在我国猪群中感染发病情况也十分普遍,给养猪业造成了严重的经济损失。PCV2无囊膜,其基因组为共价闭合、单股环状负链DNA,大小约1.76kb。PCV2ORF2编码的的结构蛋白Cap是其最主要的免疫保护性抗原,能诱导动物机体产生特异性中和抗体,是研制PCV2新型疫苗的理想靶抗原。国内外现有的PCV2商品化疫苗因其工艺繁琐、价格昂贵限制了疫苗的普及应用。新城疫病毒(NDV)反向遗传操作技术的发展为NDV作为疫苗载体防制哺乳动物疾病开辟了道路。本研究的目的是为了探索PCV2的衣壳蛋白重组NDV后在哺乳动物细胞中的表达情况,从而为研制新型PCV2疫苗提供一种思路。本研究利用NDV La Sota弱毒疫苗株的反向遗传操作平台,成功构建表达PCV2aCap蛋白的重组病毒rLa-PCV2/Cap;为了进一步增强外源蛋白的表达效果,构建了表达去全部核定位信号(NLS)的CapΔ41蛋白重组病毒rLa-PCV2/CapΔ41,以及去部分NLS的CapΔ18蛋白重组病毒rLa-PCV2/CapΔ18;为使增强接种后的细胞和体液免疫水平,在去掉部分NLS的基础上继续引入鸡白介素2的信号肽(SP),成功构建出表达CapΔ18IL2SP蛋白的重组病毒rLa-PCV2/CapΔ18IL2SP。经过间接免疫荧光试验(IFA)检验,各重组毒株均在感染的BHK-21细胞中正确、稳定地表达了Cap及其修饰后的Cap蛋白,在去掉NLS后,CapΔ41和CapΔ18均从细胞核中释放出来,并均匀存在于细胞质中。为了研究各重组毒的生物学特性,对各重组毒的鸡胚内生长特性、鸡胚平均致死时间(MDT)、鸡脑内接种指数(ICPI)、鸡静脉接种指数(IVPI)进行了测定。测定结果表明4株重组病毒均保持了亲本病毒La Sota弱毒疫苗株高滴度的鸡胚生长以及低致病力的特性。各重组毒株的免疫效果还有待进一步动物试验验证。关于PCV2的衣壳蛋白重组NDV还需对外源蛋白本身进行更进一步的修饰,以达到理想的表达水平。
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