碱蓬甜菜碱醛脱氢酶基因(ScBADH)的表达分析以及在拟南芥中的功能鉴定

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:ydy611
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干旱、高盐、冷热等外界环境,严重的影响了植物的生长及产量。甘氨酸甜菜碱(简称甜菜碱)作为季铵类化合物,它被认为是很好的渗透胁迫的抗性基因。在渗透胁迫条件下,甜菜碱除了参与细胞的渗透调节外,并且还具有能稳定生物大分子的结构和功能等特点。在植物体内,甜菜碱是以胆碱为底物,经过两步氧化来合成的,即胆碱在胆碱单氧化物酶(CMO)的作用下生成甜菜碱醛,甜菜碱醛再在甜菜碱醛脱氢酶(BADH)的作用下氧化生成甜菜碱。本文研究了在实验室已经克隆出碱蓬甜菜碱醛脱氢酶基因(ScBADH)的基础上,进一步研究了该基因在不同逆境胁迫下的表达情况;将构建好的植物表达载体,通过花序转化法转化到拟南芥植株中,并对转基因拟南芥植株进行表型分析;通过生理指标检测,比较了甘氨酸甜菜碱(Glycine betaine)、脯氨酸(Pro)、超氧化物歧化酶(SOD)在野生型和转基因拟南芥植株中含量的变化。其本文主要研究结果如下:1.利用分子生物学软件,对本实验室已经克隆得到的ScBADH基因的核苷酸序列以及由此推导出的氨基酸序列与其它植物亲缘关系较近的基因的基酸进行大量的比对,绘制ScBADH的亲缘关系树。2.本文以Actin作为内参基因,应用Real-time PCR的方法研究了碱蓬BADH基因表达情况。结果表明,在用100μM ABA、300mM NaCl和30%PEG8000分别胁迫处理Oh、6h、12h、24h、48h条件下,碱蓬BADH基因在不同的组织(根、茎、叶)当中都有表达,随着时间的变化该基因的表达量也有所不同。3.将已经构建好的植物表达载体通过花序转化法转化拟南芥,并对转基因拟南芥植株进行表型分析,结果表明ScBADH基因在拟南芥中的超表达能提高拟南芥对高盐、干旱和ABA的耐受性。4.抗逆性试验表明:经胁迫处理后,转基因植株的存活率明显好于对照组,盐胁迫转基因植株的存活率要比其它胁迫胁迫处理的存活率要高,说明ScBADH基因的超表达提高转基因植株的耐盐性更为显著。5.生理指标分析发现:在盐胁迫处理后,转基因植株甜菜碱含升高,并且累积了大量的游离脯氨酸,SOD活性降低减缓,转基因植株叶片含水量下降缓慢,说明转基因植株能较好的应对盐胁迫逆境。
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