出血性视网膜脱离动物模型的建立与研究

来源 :第四军医大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luomlkm
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目的 各种眼外伤导致的出血性视网膜脱离(hemorrhagic retinal detachment,HRD)是视力严重丧失的原因之一。其损伤机制尚未阐明,临床上也缺乏切实有效的治疗措施。本文建立兔眼HRD模型,通过直接检眼镜、B型超声和光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)检查来系统地观察HRD眼的视网膜脱离状态和视网膜下血液吸收过程;通过病理组织学检查来观察HRD眼视网膜损害的显微和超微结构变化;通过视觉电生理检查来评价HRD眼的视功能损伤。从而为HRD的进一步研究和治疗打下基础。 方法 1.动物模型的建立:健康青紫蓝兔眼,经玻璃体腔向视网膜下注入自体抗凝血0.2mL建立HRD模型,作为HRD组,并设立肝素盐水组(视网膜下注入含肝素钠生理盐水0.2mL)、盐水组(视网膜下注入生理盐水0.2mL)、假注射组(仅行视网膜穿刺,不行视网膜下注射)和正常组等对照组; 2.HRD模型的临床观察:HRD模型建立后1h,1、3、7、14和28d行直接检眼镜、B型超声和OCT检查; 3.HRD模型的组织病理学和电子显微镜检查:HRD模型建立后分别于1h,1、3、7、14和28d等时间点摘除眼球,制作火棉胶切片,苏木精—伊红染色,光学显微镜观察,并制作超薄切片行电子显微镜观察; 4.HRD模型的视功能评价:HRD建立前2d,建立后3h、1、3、7、14、21和28d行视网膜电图(electroretinogram,ERG)和视觉诱发电位(visual evoked potential,VEP)检查。 窜 口 早 匡大学硕士学位论不一结果1.视网膜下注射后 Hap组兔眼均发生 HRD,范围为 10~12个视盘直 径(disk diameter,DD),视网膜明显隆起持续约 14 d,28 d时仍可 见视网膜下部分血液残留。肝素盐水及盐水对照组兔眼均发生同样大 小的视网膜脱离(retinal detachment,RD),该 RD仅在术后门 h内 明显。假注射组兔眼视网膜穿刺孔多于术后Zd内消失,正常对照组 兔眼视网膜无变化。2.B型超声结果:HRD组,早期呈明显的中高密度回声光带,光带与 球后壁间为致密回声光点,隆起高度逐渐降低,14 d后该光带及光点 基本消失;肝素盐水和盐水对照组,RD的中高密度回声光带id后 基本消失;假注射组同正常对照组,均无变化。3.OCT结果:Hap组,早期视网膜神经感觉层隆起、增厚,随后逐渐 变薄,4周时下方视网膜仍可见隆起的神经感觉层及少量血液;肝素 盐水和盐水对照组,隆起的神经感觉层于id后大部分复位,脉络膜 反光有所增强;假注射组同正常对照组,均无变化。4.光学显微镜检查:HRD组,视网膜下充满大量红细胞、少量白细胞 和纤维蛋白成分,早期主要表现为光感受器断裂脱落,而后内、外核 层细胞数量减少,14 d后原注射区部分视网膜缺失,直至28 d部分 视网膜下仍有血液残留;肝素盐水组,呈浆液性RD表现,7d后视 网膜几乎全部复位,光感受器变短,结构紊乱,部分区域内、外核层 略薄,y E色素紊乱:盐水组变化同肝素盐水组;假注射组早期少量 细胞水肿。5.电于显微镜检查:HRD组,早期光感受器外节膜盘脱落、破碎,内 节线粒体高度肿胀,随后光感受器外节脱落、消失,内节变性破碎, 内外核层出现核固缩、核碎裂,细胞数目减少,14 d后原注血区部分 视网膜缺失,或见yE直接与类似于内核层的细胞相接;肝素盐水 组,光感受器外节与 RPE分离,排列紊乱,7 d后外节接近 yE,RPE 细胞色素分布不均,内层视网膜细胞出现不同程度的变性表现;盐水 组变化同肝素盐水组;假注射组术后lh少量细胞水肿,后变化同正 -5-西京医院眼科·全军眼科研究所 京 囚 早 匡大学硕士单位论文一 常对照组。6.视觉电生理检查结果:HRD建立后ERG各波的潜伏期均延长,3~7 d升至最高点,后有所恢复,较术前延长约 5~30%。振幅多于 3 d 降到最低点,7 d时略有回升,遂进入平台期,约相当于术前的 50%。 28 d多数波幅与其余两组差异显著(P<0刀5)。RD组相应的各波潜 伏期术后略有延长,id后接近术前值。振幅多在术后id前后达到 最低点,与假注射组有显著差异(尸<0刀5)。28 d与假注射组无明显 差异(P>0刀5)。假注射组术后 3 h各波的潜伏期和振幅分别略有延 长和降低,而后达术前值。HRD组VEP的潜伏期和振幅值术后较 RD组和假注射组分别延长和降低,3d后无明显变化。结论1.采用经玻璃体腔在兔眼视网膜下注入自体抗凝血的方法成功建立了 HRD动物模型,方法简便、重复性好。2.B型超声及OCT对HRD均能作出较为明确的诊断,二者结合可更全 面有效的观察到HRD视网膜下血液吸收缓慢,视网膜明显变薄。3.光学显微镜和电子显微镜检查发现HRD对视网膜的损伤是涉及视网 膜全层的严重的不可逆损害,早期即可发生,14 d时可见部分区域视 网膜缺失。4.采用视觉电生理
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