研究背景血管钙化是心血管事件发生的独立危险因素,是钙磷在血管壁异常沉积的过程。血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）通过从收缩表型向成骨样表型转变,在血管钙化过程中发挥重要作用。在血管钙化过程中存在持续性DNA损伤,通过减轻DNA损伤、增强DNA修复可以减缓血管钙化发生。Sirtuin6（SIRT6）是一种组蛋白去乙酰化酶,可参与调控DNA损伤修复。已有研究报道,SIRT6可以通过减轻血管平滑肌细胞的DNA损伤缓解小鼠动脉粥样硬化。然而,目前关于SIRT6是否通过影响DNA损伤调控血管钙化尚不清楚。研究目的明确SIRT6对血管钙化及血管平滑肌细胞成骨样分化的作用,并阐明其分子调控机制。研究方法在体外及离体实验中,使用高磷高钙培养基诱导血管平滑肌细胞、动脉环钙化;在体内实验,通过注射维生素D3（Vitmin D3,VitD3）诱导小鼠主动脉钙化;采用腺病毒载体、小干扰RNA及条件性敲除小鼠改变SIRT6的表达水平;通过茜素红染色、甲酸定量及钙定量检测钙沉积情况,蛋白免疫印迹及酶活性检测成骨样分化标志物表达水平,彗星实验检测DNA碎片化情况,蛋白免疫印迹及免疫荧光检测DNA损伤标记物及相关分子表达水平。研究结果蛋白免疫印迹及免疫荧光结果显示:在钙化的人体血管平滑肌细胞、人体动脉环及VitD3诱导的小鼠钙化主动脉中,SIRT6表达降低。过表达SIRT6可减轻人体血管平滑肌细胞、小鼠及人体动脉环钙化,并下调血管平滑肌细胞中成骨样分化标志物 Runt相关转录因子 2（Runt-related transcription factor 2,Runx2）和骨形态发生蛋白2（bone morphogenetic protein 2,BMP2）表达。相反,在敲低SIRT6的人体血管平滑肌细胞及敲除SIRT6的小鼠血管平滑肌细胞中,钙化加重及Runx2及BMP2表达水平上调。同样,在VitD3诱导下,SIRT6条件性敲除显著加重小鼠主动脉钙化,并伴有ALP活性增加、Runx2表达上调及平滑肌收缩蛋白α-平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscle actin,α-SMA）表达下调。在机制方面,过表达SIRT6减轻钙化细胞DNA碎片化、下调DNA损伤标记物γ-H2AX并上调DNA应答分子p-ATM表达;而敲低SIRT6加重钙化细胞DNA碎片化、上调γ-H2AX表达并下调p-ATM表达。在钙化条件下,敲低ATM可以消除过表达SIRT6对人体血管平滑肌细胞钙化及DNA损伤的保护作用。研究结论1.在血管钙化过程中,SIRT6的表达水平下调。2.SIRT6抑制血管平滑肌细胞和动脉环的钙化。3.平滑肌SIRT6特异性敲除加重小鼠的主动脉钙化。4.敲低SIRT6加重钙化血管平滑肌细胞的DNA损伤。5.SIRT6通过激活ATM介导的DNA损伤修复抑制血管平滑肌细胞钙化。