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目的:通过研究探讨姜黄素(Curcumin,Cur)对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/CDDP体外增殖及其凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达影响,分析姜黄素对卵巢癌SKOV3/CDDP耐药逆转的可能机制,为中药辅助化疗剂的临床应用提供理论依据。方法:1体外培养亲本细胞SKOV3(人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞)及其顺铂耐药细胞SKOV3/CDDP并连续传代,用不同浓度的顺铂(1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml、8μg/ml、16μg/ml、32μg/ml、64μg/ml)分别作用于SKOV3及SKOV3/CDDP 24h,用MTS法测得SKOV3/CDDP的耐药指数。2以不同浓度的Cur(0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L)分别作用于SKOV3/CDDP细胞24h、48h、72h后,以MTS法检测其对SKOV3/CDDP细胞生长的影响。检测低浓度的Cur(10μmol/L)联合顺铂较单用顺铂对细胞耐药指数的影响,观察Cur是否对SKOV3/CDDP有化疗增敏作用。3采用流式细胞术检测Cur对细胞凋亡的影响,实验分为以下四组:(1)对照组:仅含10%胎牛血清的DMEM/F12细胞培养液培养的SKOV3/CDDP细胞。(2)Cur组:10μmol/LCur作用的SKOV3/CDDP细胞。(3)CDDP组:3.8μg/ml顺铂作用的SKOV3/CDDP。(4)Cur+CDDP组:10μmol/L Cur和3.8μg/ml顺铂同时作用的SKOV3/CDDP细胞。4 Western-Blotting检测以上四种分组处理后细胞的凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、BAX的表达情况。5 RT-qPCR检测检测以上四种分组处理后细胞的凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、BAX的mRNA表达。结果:1不同浓度的顺铂分别作用SKOV3及SKOV3/CDDP 24h后,skov3/cddp的细胞生存率明显高于其亲本细胞skov3(p<0.001),skov3/cddp和skov3的ic50分别为31.79和3.72。耐药指数(ri)=ic50(skov3/cddp)/ic50(skov3)=8.54。2mts显示,0μmol/l、10μmol/l、20μmol/l、40μmol/l、60μmol/l、80μmo/lcur作用24h后skov3/cddp抑制率分别为(0.00±6.17)%、(4.82±5.06)%、(23.15±2.56)%、(40.38±3.49)%、(57.88±1.27)%、(59.72±2.11)%(f=242.67,p<0.001)。10μmol/l与空白对照组、60μmol/l与80μmol/l组相比无统计学意义,其他任意两两比较均有统计学意义。作用48h后抑制率分别为(0.00±6.48)%、(8.56±3.48)%、(35.05±4.09)%、(55.27±4.00)%、(69.42±2.05)%、(80.33±0.95)%(f=347.66,p<0.001)任意两两比较均有统计学意义。作用72h抑制率分别为(0.00±6.19)%、(23.18±6.49)%、(45.20±3.62)%、(77.07±1.49)%、(79.79±1.52)%、(80.35±1.01)%(f=349.96,p<0.001),40μmol/l、60μmol/l、80μmol/l三组间无差异,其余任意两两比较均有统计学差异。生长抑制作用随药物浓度的增高和作用时间的延长而增加。当cur≤10μmol/l时无论作用24h、48h细胞生存率均≥90%,因此可以认为,姜黄素在此浓度对skov3/cddp细胞无细胞毒性作用,并将该剂量作为逆转剂量。经10μmol/lcur和顺铂联合作用于skov3/cddp细胞48h,较单用顺铂相比,细胞生存率明显降低,顺铂的细胞毒性作用明显增强,skov3/cddp细胞的ic50由(11.77±0.03)μg/ml下降至(3.47±0.54)μg/ml(p<0.001)。3fcm显示,空白对照组、10μmol/lcur组、3.8μg/ml顺铂组、联合用药组分别作用skov3/cddp细胞48h后细胞凋亡率分别为(0.02±0.02)%、(4.45±0.83)%、(6.49±2.11)%、(21.31±3.60)%(与对照组相比p=0.01<0.05、p=0.03<0.05、p=0.009<0.01),与对照组相比,10μmol/lcur单药组或与3.8μg/ml顺铂联合用药组均能诱导增加skov3/cddp细胞凋亡。且10μmol/lcur单药组与联合用药组相比差异有统计学意义,两者联合使用时诱导效果更加显著(p=0.004<0.01)。4western-blotting检测:空白对照组、10μmol/lcur、3.8μg/ml顺铂单独及联合用药作用于skov3/cddp细胞48h后,凋亡相关蛋白caspase-3、bax、bcl-2的相对表达量。结果显示,联合用药组较空白对照组可显著增加凋亡蛋白caspase-3、bax的表达(p<0.001、p<0.001),降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.001)。且联合用药组与3.8μg/ml顺铂组相比,同样增加了凋亡蛋白Caspase-3、Bax的表达(P<0.01、P<0.001),降低了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.01)。5 RT-qPCR结果显示,空白对照组、10μmol/LCur、3.8μg/ml顺铂单独及联合用药作用于SKOV3/CDDP细胞48h后,联合用药组作用较空白对照组可增加SKOV3/CDDP细胞Caspase-3、Bax mRNA的相对表达量(P<0.001,P<0.01),降低Bcl-2 mRNA的相对表达量(P<0.001)。且联合用药组与3.8μg/ml顺铂组相比,也同样增加了SKOV3/CDDP细胞Caspase-3、Bax mRNA的相对表达量(P<0.001,P<0.01),降低Bcl-2mRNA的相对表达量(P<0.01)。结论:1 Cur明显抑制卵巢癌SKOV3/CDDP细胞体外增殖,其抑制作用具有剂量和时间依赖性。2低剂量的Cur对卵巢癌SKOV3/CDDP细胞具有化疗增敏作用,可以增强顺铂的细胞毒作用。3 Cur具有诱导卵巢癌SKOV3/CDDP细胞凋亡的作用,且这种作用在与顺铂联合使用时效果更好。4 Cur联合顺铂应用于SKOV3/CDDP细胞时,可以在基因转录水平及蛋白表达水平上调促凋亡蛋白Caspase-3、Bax,下调抗凋亡蛋白Bcl-2,可见Cur逆转耐药的机制可能是增强肿瘤细胞的凋亡作用实现的。