钩藤碱对氧糖剥夺星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达的影响

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目的观察在氧糖剥夺/复氧(1h/24h)条件下,大鼠海马区星形胶质细胞(As)高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和细胞周期依赖蛋白激酶5(CDK5)mRNA的表达变化,并观察钩藤碱对氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5mRNA表达的影响。方法取刚出生(1-3d内)SD大鼠海马区组织进行星形胶质细胞原代培养,经细胞换液、细胞传代培养去除其它细胞后取第3代细胞进行细胞爬片,行星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光鉴定,星形胶质细胞阳性率达90%-95%以上时细胞可用于后续实验。将实验分为四组:空白对照组、缺血缺氧组、钩藤碱低剂量组(0.02mg.ml-1)、钩藤碱高剂量组(0.2mg.ml-1)。将细胞培养瓶置于厌氧罐内建立体外细胞缺血缺氧模型,收集各组细胞提取各组总RNA,进行实时荧光定量PCR检测各组星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达。结果1、星形胶质细胞原代培养6-7天细胞已基本铺满细胞培养瓶瓶底,主要为星形胶质细胞,形态不规则。传代培养的星形胶质细胞,可见其形态不规则,大多为多角形,细胞体积增大,胞浆丰富,细胞核偏于胞体一侧,呈圆形或卵圆形,折光性较低,部分细胞的突起变得细长,6-7天后细胞基本铺满瓶底;氧糖剥夺1小时后,细胞失去原来的形态,变为长梭形,胞体水肿,胞核内可见细颗粒样物质,突起变得更为细长,各细胞间相互交织成网状。荧光显微镜下观察到GFAP阳性细胞形态不规则,呈扁平状,细胞边缘清晰,有部分粗大突起,大多数细胞显示绿色荧光,星形胶质细胞的阳性率大约为90%-95%。2、缺血缺氧组星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA的表达较空白对照组明显升高(p<0.05);3、钩藤碱低剂量组及高剂量组较缺血缺氧组星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA的表达明显下调(p<0.05),钩藤碱高剂量组与低剂量组表达差异并不是很明显(p>0.05)。结论1、海马组织通过胰酶消化法原代培养、换液、传代培养去除其它细胞后可获得较高纯度的星形胶质细胞。2、氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA表达上调;钩藤碱干预可下调氧糖剥夺/复氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5 mRNA的表达,提示钩藤碱可能对缺氧缺氧后星形胶质细胞HMGB1和CDK5的表达具有抑制作用。
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