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目的:心房颤动简称房颤（atrial fibrillation，AF），是常见的快速型心律失常之一，因其发病率高、并发症严重而受到高度重视。AF的治疗手段多样，但以药物治疗为主，现有的抗心律失常药物多具有致心律失常作用，因此需要寻找更为安全有效的治疗AF的药物。目前Kv1.5通道已成为AF药物治疗的新靶点，寻找Kv1.5通道（介导IKur电流）阻断剂是AF治疗药物开发的新导向。既往研究证实杨梅素(myricetin，Myr)的衍生物六甲基杨梅素（Hexamethyl myricetin，HMM）可阻断IKur，也有研究发现Myr可以降低心率。二氢杨梅素(Dihydromyricetin，DMY)是Myr的一种衍生物，二者结构相似。因此，我们推断Myr及DMY对IKur可能有抑制作用，通过延长动作电位时程(APD)和有效不应期（ERP）而起到一定的抗心律失常作用。本研究以HEK293细胞作为载体，将人的IKur基因（即hKv1.5，KCNA5）表达在HEK293细胞上，旨在1.观察Myr及DMY对hKv1.5通道的抑制作用。2.比较Myr与DMY对hKv1.5通道电流（即IKur）的作用特点。 方法:1.构建含绿色荧光蛋白基因的野生型hKv1.5质粒（hKv1.5cDNA in pEGFP-N1 vector，简称hKv1.5质粒），并进行酶切鉴定，基因测序及扩增。2.将hKv1.5质粒转染HEK293细胞，获得表达hKv1.5的HEK293细胞，即hKv1.5-HEK293。通过观察HEK293细胞上绿色荧光的表达，Western blotting技术检测hKv1.5通道蛋白的表达，全细胞膜片钳技术检测转染hKv1.5质粒的HEK293细胞电流，以证实hKv1.5通道成功表达在HEK293细胞上。3.将事先配制好的含不同浓度Myr的浴液以及不同浓度DMY的浴液通过膜片钳灌流系统加入细胞外液，荧光显微镜下，采用全细胞膜片钳技术记录IKur，观察Myr以及DMY对IKur的影响。4.采用Western blotting技术检测Myr（或DMY）处理24h后hKv1.5-HEK293的Kv1.5通道蛋白表达的变化。 结果:1.成功构建含绿色荧光蛋白基因的野生型hKv1.5质粒。2.hKv1.5通道成功表达在HEK293细胞上。①转染后的HEK293细胞表达绿色荧光。②hKv1.5蛋白特异性抗体能检测到hKv1.5蛋白的表达。③Control组HEK293细胞电流幅值小，转染hKv1.5质粒的HEK293细胞电流幅值明显增大。3.Myr对IKur的抑制作用:①在Myr浓度为0～10μM范围内，Myr能够浓度依赖性的抑制IKur。10μM Myr使IKur电流密度（current density，等于膜电流Im除以膜电容Cm，即Im/Cm，单位为pA/pF）从215.04±40.59降至77.72±17.94(P＜0.05，n=5)。Myr对IKur的半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration，IC50）为6.39±1.03μM(n=5)。②Myr对IKur有时间依赖性阻断作用。5μM Myr作用5，10，15，20 min时，其对IKur的抑制比，即(IC-IA)/Ic分别为0.31±0.12，0.41±0.12，0.53±0.09，0.55±0.11（P＜0.05，n=7，与Control组相比）。在5～20min范围内Myr对IKur电流抑制比从0.31±0.12增加至0.55±0.11，表明Myr对Ikur的抑制作用随着时间延长而增强。③Myr对IKur有频率依赖性阻断作用。刺激频率为0.5，1，3，4Hz时，IKur电流密度分别为376.23±1.30，340.01±4.25，290.59±4.44和270.19±4.28(pA/pF)(n=5)，随着刺激频率的增大，Myr抑制作用增强，IKur减小。4.DMY对IKur的抑制作用:①10μM DMY作用下IKur电流密度从116.59±14.30(pA/pF)降低至57.23±9.57(pA/pF)(P＜0.001，n=14);DMY对IKur抑制作用的IC50为4.69±0.87μM(n=14)。②DMY作用0，5，10，15，20min时的IKur电流密度分别为（pA/pF）(n=18)116.59±14.30，100.46±12.29，98.10±12.70，92.67±11.77，75.47±8.8(P＜0.05，n=18，两两比较)。以Control组的Ikur电流密度为标准（设定为1），计算出5，10，15，20 min时的标准化IKur电流密度分别为0.78±0.09，0.75±0.08，0.69±0.08，0.62±0.08(P＜0.05，n=18，两两比较)。表明DMY对IKur有时间依赖性抑制作用。③刺激频率为1，3，4Hz时，DMY作用下IKur电流密度分别为(pA/pF)116.56±2.66，106.93±2.66，100.13±1.28(两两比较，P＜0.05，n=36)。设定1Hz时IKur（pA/pF）为1，得到3，4Hz刺激频率下的标准化电流密度，分别为0.92±0.01，0.86±0.01(两两比较，P＜0.001，n=36)。表明在刺激频率为3Hz和4Hz时DMY对IKur的抑制作用强于1Hz，DMY对IKur的阻断作用随着刺激频率的增加而增强，呈现出频率依赖性。5.Myr对hKv1.5蛋白表达有抑制作用，其抑制作用随着Myr浓度增大而增强;DMY对hKv1.5蛋白表达无抑制作用。 结论:1.Myr及DMY对hKv1.5-HEK293细胞的IKur均有抑制作用，且其抑制作用呈浓度依赖性、时间依赖性及频率依赖性;2.DMY与Myr对IKur的作用相似，Myr对IKur的抑制作用强于DMY。3.Myr降低hKv1.5蛋白表达，DMY对hKv1.5蛋白表达无影响。