目的:通过探讨Kallistatin基因在男性生精功能中的作用,初步探索Kallistatin基因在生精功能障碍中的机制,为精子发生调控和生精功能障碍寻找到新的治疗靶点。方法:获取患者知情同意后,收集于2017年9月至2020年1月在云南省第一人民医院生殖医学科就诊的男性精液样本,通过ELISA技术检测kallistatin在精浆中的表达水平,相关性分析精浆中kallistatin表达水平与精子参数的关系。收集行睾丸穿刺手术男性不育患者的睾丸组织,并分为正常对照组、少精子症组、非梗阻性无精子症组(每组10例),首先通过RT-PCR、Western blot、HE染色和免疫组织化学技术检测kallistatin、组织激肽释放酶1(KLK1)和B2受体在睾丸组织和精子中的表达水平及表达部位、JOHNSEN评分,然后通过RT-PCR、Western Blot技术检测睾丸组织中细胞凋亡水平(Bcl-2、Bax和Caspase-3),再通过Masson染色和天狼猩红染色法检测睾丸间质纤维化水平和I/III型胶原纤维比例,最后通过相关性分析睾丸组织中kallistatin蛋白表达水平与生精功能、细胞凋亡水平和组织纤维化水平的关系。结果:kallistatin在正常组、少精子症组和非梗阻性无精子症精浆中的表达水平高低顺序依次为正常组>少精子症>非梗阻性无精子症(P<0.001),少精子症组中kallistatin表达水平与精子浓度呈正相关趋势。kallistatin高表达于睾丸各级生精细胞、精子、Sertoli细胞、间质细胞和管周肌样细胞胞浆内且与KLK1表达水平相当(P>0.05)。kallistatin在正常组、少精子症组和非梗阻性无精子症睾丸中的表达水平高低顺序依次为正常组>少精子症>非梗阻性无精子症(P<0.001),且kallistatin表达水平与JOHNSEN评分呈正相关趋势。非梗阻性无精子症和少精子症患者睾丸组织细胞凋亡水平显著高于正常组(P<0.05),其中非梗阻性无精子症和少精子症组Bcl-2(抑制细胞凋亡蛋白)的表达水平显著低于正常组,依次为正常组>少精子症>非梗阻性无精子症(P<0.05),而非梗阻性无精子症组Bax(促细胞凋亡蛋白)、Bax/Bcl-2和Caspase-3表达水平显著高于正常组和少精子症组(P<0.05),表现为非梗阻性无精子症>少精子症>正常组,且细胞凋亡水平与睾丸组织kallistatin蛋白表达水平呈负相关趋势。非梗阻性无精子症和少精子症患者睾丸组织纤维化水平显著高于正常组(P<0.05),水平高低依次为非梗阻性无精子症>少精子症>正常组,纤维化程度及I/III型胶原纤维比例与kallistatin表达水平呈负相关趋势。结论:kallistatin与男性生精功能具有明显相关性,kallistatin表达水平降低可能导致生精功能障碍。kallistatin可能通过抗细胞凋亡、抗纤维化等途径参与精子发生调控,其调控机制有待进一步研究证实。