目的:观察紫花牡荆素(casticin,CAS)对肝癌Hep G2细胞RASSF1A基因表达的影响。方法:体外培养人肝癌细胞系Hep G2,并根据不同的实验目的分为空白对照组和不同浓度CAS处理组。其中空白对照组仅给予等体积培养基处理;CAS干预组采用0.5μmol/L,1.0μmol/L,2.0μmol/L CAS作用Hep G2细胞0~48h。采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测Hep G2细胞CAS处理后RASSF1A基因启动子区的甲基化水平。提取细胞总RNA和蛋白,实时定量PCR和Western blot分别检测RASSF1A m RNA和DNA甲基转移酶1(DNMT1)蛋白的表达。结果:1.MSP结果显示,Hep G2细胞未经CAS处理时,细胞内甲基化RASSF1A含量呈一定表达水平。当给予不同浓度CAS处理0~48h后,甲基化RASSF1A含量随着CAS浓度的增高而降低,与之相对应的是,随着CAS浓度的增高,非甲基化RASSF1A基因含量随之增多。2.Hep G2细胞中RASSF1A m RNA含量低下,而经不同浓度CAS处理0~48h后,real-time PCR结果显示RASSF1A m RNA水平随之增高,并具有一定的剂量和时间依赖性。此外,CAS也能上调RASSF1A蛋白的表达。3.Hep G2细胞在静息状态下,DNMT1 m RNA呈较高水平表达。而CAS处理后,随着浓度的递增,DNMT1 m RNA含量随之降低。此外,Western blot也获得了类似的效果。结论:CAS能降低Hep G2细胞中RASSF1A启动子的甲基化水平,并促进其表达;CAS能降低Hep G2细胞中DNA甲基转移酶1的表达水平。