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目的 (1)建立维生素B2光化学法灭活病毒试验方法,探讨维生素B2工作浓度与紫外线辐照时间对灭活效果的影响。(2)观察维生素B2光化学法对血浆中病毒及细菌的灭活效果。(3)研究维生素B2光化学法处理对血浆中凝血因子活性的影响。 方法:(1)以水泡性口腔炎病毒(Vesiculer Stomatitis Virus,VSV Indiana株)作为模型病毒,将滴度为7.25(1g,TCID50)的病毒悬液中分别加入终浓度为50,100,200及300μmol/L维生素B2溶液,含不同浓度维生素B2的病毒悬液分别以辐照剂量为0,600,1200,2400,3600及7200mJ/cm2(0,5,10,20,30,60分钟)紫外光照射,观察维生素B2浓度以及紫外线强度对灭活效果的影响。按终点稀释法,在Hep—2细胞长成单层的96孔细胞培养板上进行细胞对照、病毒对照、单纯维生素B2对照、单纯紫外线对照及处理后样本病毒滴度的滴定。 (2)以水泡性口腔炎病毒作为模型病毒,以大肠埃希菌作为革兰氏阴性菌的模型菌,金黄色葡萄球菌作为革兰氏阳性菌的模型菌,将病毒浓度为6.251gPFU/ml的病毒悬液按1∶10比例加入血浆中、浓度为108/ml的大肠埃希菌及108/ml的金黄色葡萄球菌菌液按1∶100的比例分别加入血浆中,加入终浓度为50,100,200及300μmol/L维生素B2溶液至各份血浆,含不同浓度维生素B2的病毒悬液分别以强度为0,600,1200,2400,3600及7200mJ/cm2紫外光照射(0-60分钟),以病毒蚀斑试验测定处理后及各对照病毒浓度,以细菌计数测定处理后含菌血浆及各对照细菌浓度。 (3)以正交试验原则选择最佳灭活条件,检测最佳灭活条件处理后的血浆及未处理对照、仅用维生素B2处理对照及紫外线照射处理对照血浆Ⅴ、Ⅷ、Ⅹ因子活性,检测PT、APTT、TT时间,纤维蛋白原浓度及血浆PH值,观察处理前后及各处理因素对上述试验结果的影响。 结果:(1)工作浓度为300μmol/L的维生素B2结合辐照剂量为1200mJ/cm2紫外