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本试验采用大鼠cDNA表达谱芯片研究了不同锌水平对SD大鼠脑垂体中功能基因表达的影响,筛选锌营养相关基因,并分析了有关生理生化指标,旨在从基因角度来探讨微量元素锌的分子营养机理。本试验设定三个锌水平,分别为正常(zinc adequate,ZA,35.94mg/kg,对照)、缺锌(zinc deficient,ZD,3.15mg/kg)和高锌(zinc overloaded,ZO,347.50mg/kg),日粮根据AIN-93G实验动物纯合日粮配方配制。选用断奶后1周左右体重95±5g的雄性SD大鼠240只,其中ZD组60只,ZA组120只,ZO组60只,分笼饲养,每笼5只,每只标记,于屏障系统中饲养6周,每周定期称重。 研究发现,日粮锌水平能显著影响SD大鼠生长发育。与ZA组相比,ZD组大鼠生长缓慢,饲料转化率低;而ZO组生长较快,饲料转化率与ZA组接近。在第2~5周期间,三组差异极其显著(P<0.01),第6周时ZD组体重比ZA组低48.1%(P<0.01),ZO组比ZA高2.6%(P<0.05)。此外,在试验期间观察到,ZD组大鼠毛发紊乱无光泽,食欲低,活动少,精神差,并在第二周出现脱毛现象,随着时间的延长脱毛现象加重,脚上皮肤粗糙,角质化严重,背部及眼角皮肤脱屑、出血,眼分泌物增多。 锌水平影响SD大鼠体重的同时也影响有关器官的相对重量。由器官重量与体重的比值可看出:与ZA组相比,ZD、ZO组中肝脏在体重中的比例依次低6.7%(P<0.05)、4.9%(P<0.05);ZD、ZO组中脾脏在体重中的比例依次高9.8%(P<0.05)、22.1%(P<0.01);ZD组股骨、肾脏在体重中的比例也依次高69.9%(P<0.01)、27.9%(P<0.01),而ZO组无明显差异(P>0.05)。 透视电镜发现,ZO组大鼠的十二指肠前端微绒毛高度与密度较低,ZD组的微绒毛不整齐,且较稀。光镜下观察空肠绒毛发现,与ZA组相比,ZD组空肠绒毛高度与密度依次低7.3%(P<0.01)、46.9%(P<0.01),ZO组则无明显变化(P>0.05)。 生化指标测定得出,ZD、ZA和ZO三组的十二指肠内容物中总蛋白水解酶活性无明显差异(P>0.05);ZD十二指肠内容物淀粉酶活性比ZA组低42.4%,ZO组与ZA组差异不显著(P>0.05);ZO组十二指肠内容物脂肪酶活性比ZA组低32.9%(P<0.01),ZD组与ZA组差异不显著(P>0.05)。ZD组血浆中碱性磷酸酵(ALP)活性比ZA组低40.7%(P<0.01);ZO组ALP活性比ZA组高18.9%(P<0.05)。ZO组血浆中铜兰蛋白(CP)含量比ZA组高36.5%(P<0.01),ZD组与ZA组差异不显著(P>0.05)。ZD、ZA、ZO三组浙江大学硕士学位论文摘要肝脏中总SOD活性、MDA含量差异不显著(P>0.05),ZD组肝脏中Cu-Zn SOD活性比ZA组低29.4%(P<0.01),20组无显著变化(P>0.05)。ZD组肝脏金属硫蛋白(MT)含量比ZA组高12.1%(P<0.01),20组MT含量比ZA组高3.8%(P<0.05)。 原子吸收法测定各组空肠、肝脏、脾脏、肾脏、股骨和毛中的金属含量发现,与ZA组中Zn、Cu、Fe和Mn含量依次进行比较得出:① ZD组空肠中低22.8%(P<0.01),高58.1%(P<0.01),无显著差异(P>0.05)和低76.0%(P<0.01);20组中高15.6%(P<0,01),低40.3%(P<0,05),无显著差异(P>0.05)和低36.2%(P<0.05);②ZD组肝脏中无显著差异(P>0.05),低10.5%(P<0.05),无显著差异(P>0.05)和低39.8%(P<0.01):20组肝脏中则高22.4%(P<0.01),无显著差异(Cu和Fe,P>0.05)和高14.2%(P<0.05);③ZD组脾脏中无显著差异(P>0.05),低46.8%(P<0.01),高142.9%(P<0.01)和低61.9%(P<0 .01):20组股骨中四种元素含量则均无显著差异(P>0.05);④ZD组股骨中低66.3%(P<0.01),高183.5%(P<0.01),低73.5%(P<0.01)和低57.9%(P<0.01):20股骨中高18.3%(P<0.01),138.8%(P<0.01),无显著差异(Fe和Mn,P>0.05);⑤ZD组毛中低43 .6%(P<0.01),40.0%(P<0.01),54.7%(P<0.01)和53.0%(P<0.01);20组毛中无显著差异(P>0.05),低12.9%(P<0.05),19.2%(P<0.05)和14.0%(P<0.01);⑥ZD组肾脏中低13.8%(P<0.05),无显著差异(Cu和Fe,P>0.05)和低73.5%(P<0.01);20组肾脏中无显著差异(Zn,Cu和Fe,P>0.05),和低39.7%(P<0.01)。 采用大鼠cDNA表达谱芯片筛选了大鼠垂体中差异表达的基因。以国际通用的ratio比值2和0.5分别为上调和下调界限,与ZA组相比,筛选出的基因如下:①20芯片中上调基因252条:其中在ZD芯片中上调的基因为126条,不变的126条;②20芯片中下调的基因41条:其中ZD芯片中下调的为13条,不变的28条;③zD芯片中上调的基因189条:其中20芯片中上调127条,不变的62条;④ZD芯片中下调的基因122条:其中20芯片中下调15条,不变的107条。对上述基因按分子功能、细胞组分、生物加工等进一步分析表明,这些基因的表达产物主要与蛋白质合成、离子转运、信号转导、转移酶活性、激酶活性、膜完整性、DNA修复、DNA结合、RNA加工、RNA结合、抗氧化、吞噬作用等有关,进而表明锌具有调控SD大鼠垂体中相关基因表达的功能。