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目的:本实验通过成膜水化法制备携带Lyp-1靶头的紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸纳米胶束(Lyp-1-PTX-mpeg-pla)解决紫杉醇强疏水性问题并通过体外实验和体内实验对该药物胶束的药效进行考察。在利用纳米级颗粒在肿瘤血管中的高通透性和滞留效应发挥被动靶向作用的同时,Lyp-l靶头与肿瘤细胞细胞膜上过表达的P32蛋白特异性结合发挥该药物的主动靶向作用,两种作用同时作用于大肠癌C26细胞,意在探讨Lyp-1靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸纳米胶束对大肠癌的治疗效果。方法:1.制备抗肿瘤药物:紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束(PTX-mpeg-pla)、载Lyp-1靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束(Lyp-1-PTX-mpeg-pla)。通过测定制备纳米胶束的粒径、电位来考查两种纳米胶束的最佳制备条件,测定其包封率和载药量,并在电镜下评估胶束纳米粒子的形态。2.体外实验(1)细胞增殖抑制实验,通过原料药PTX以及PTX-mpeg-pla、载靶头Lyp-1-PTX-mpeg-pla这两种胶束在相同浓度梯度下对细胞的抑制作用来评价药物效果。(2)细胞迁移实验,将药物分成生理盐水组、原料药物PTX组、PTX-mpeg-pla组和靶头组,投入药物浓度为安紫杉醇含量的相同浓度,观察各组药物对6孔板中C26细胞划痕的抑制效果。(3)激光共聚焦检测C26细胞摄取,将香豆素6代替紫杉醇,运用相同的方法制备香豆素6聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束(c6-mpeg-pla)和载Lyp-1靶头香豆素6聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束(Lyp-1-c6-mpeg-pla),通过激光显微镜观察两组药物中香豆素6进入C26细胞的能力。(4)流式细胞术测凋亡,将药物分成生理盐水组、原料药物PTX组、PTX-mpeg-pla组和靶头组,给予12孔板放置相同的药物浓度(按紫杉醇含量计算),最后收集12孔板中消化掉的细胞,在光源为488nm 氩离子激光器进行检测,对不同药物组造成C26细胞凋亡图像进行分析。3.体内实验(1)大肠癌小鼠原位模型的建立,选择体重为16-17g的雄性BALB/c小鼠(SPF级),动物房适应一周后,给每只小鼠肛门直肠黏膜下注射大肠癌C26细胞1.5×106个/只,待肿瘤长至肉眼可见时,随机挑选一只小鼠处死、解剖,对瘤体做病理切片,评价是否成功建模。(2)对建模成功的小鼠进行分组,测瘤,测重,给药,处死,观察病理切片。结果:1.使用成膜水化法在紫杉醇与聚乙二醇单甲醚聚乳酸比例为1:10、水浴温度为50℃,转速为70r/min,水化体积为2ml的条件下制备的紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组(PTX-mpeg-pla)的载药量为 6.17±0.37%,包封率为 96.22± 1.22%,粒径为 15.91 ± 1.5nm、PDI 为 0.090 ±0.001、zeta电位为-1.70±0.4mv。载Lyp-1靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组的平均粒径为16.02±0.09nm、PDI 为 0.092 ±0.003、zeta 电位为-2.95±0.25mv、包封率95.82±0.38%,载药量 5.92 土 0.07%。2.体外实验:载Lyp-1靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组和紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组较原料药物组有更好的抑制大肠癌C26细胞作用,抑制细胞迁移作用更显著,能更快的进入大肠癌细胞,增强中晚期凋亡作用。载Lyp-1靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组较单纯使用聚乙二醇单甲醚聚乳酸包裹紫杉醇胶束组在细胞增殖抑制实验中抑制效果更显著,对中晚期凋亡作用更强。3.体内实验:成功建立的BALB/c小鼠大肠癌原位漠型分成4组进行实验,载Lyp-l靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组比紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组、原料药物组、生理盐水对照组的肿瘤体积更小(P<0.05),高倍镜下无肝脏转移。载Lyp-1靶头紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组和紫杉醇聚乙二醇单甲醚聚乳酸胶束组较紫杉醇原料药组对小鼠毒性药物毒性小(P<0.05)。结论:1.Lyp-1-PTX-mpeg-pla稳定性好,包封率达到96%以上,载药量6%以上,粒径16nm,并且纳米颗粒的分布均匀;2.Lyp-1-PTX-mpeg-pla纳米胶束能进入肿瘤细胞,通过诱导凋亡途径对肿瘤细胞的产生生长抑制作用;3.Lyp-1-PTX-mpeg-pla纳米胶束相比其他对照药物能更好的抑制肿瘤的生长和抑制转移,毒性更小。