论文部分内容阅读
目的：
重症肌无力（Myasthenia gravis,MG）是一种由乙酰胆碱受体（Acetylcholine receptor,AChR）抗体介导的、T细胞参与的自身免疫性疾病。目前治疗方法主要包括药物治疗及胸腺切除，但发病机制尚未明确。非神经元型胆碱能系统（Non-neuronal cholinergic system,NNCS）是一种存在于淋巴细胞、内皮细胞等细胞中完整的、独立的胆碱能系统，包括毒蕈碱型受体(mAChR,M1～M5)、烟碱型受体(nAChR,α1～α10、β1～β4、γ)、合成乙酰胆碱的胆碱乙酰转移酶以及分解ACh的乙酰胆碱酯酶等。目前已经证实该系统在免疫细胞上表达且通过自分泌/旁分泌调节免疫反应。α7nAChR作为非神经元型胆碱能系统的重要组分，其作用也是举足轻重的。据文献报道，激活α7nAChR可增强T淋巴细胞的免疫抑制功能，并且α7nAChR在多种疾病中发挥重要调控作用，比如类风湿性关节炎、肺癌、胃癌等等，由此可见，α7nAChR在炎症反应中发挥重要的作用。但是，关于α7nAChR在MG发病中的作用机制尚不明确，本研究主要通过检测MG患者外周单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中α7nAChR的表达，并在T细胞活化的基础上，进行α7nAChR拮抗/激活干预，对α7nAChR调节T细胞增殖及相关细胞因子的表达进行探讨，为后续研究其作用机制奠定基础。
方法：
1.一般资料
选取2018年9月～2019年3月郑州大学第二附属医院和河南省人民医院MG患者共10例，年龄9～63(31.2±15.4)岁，男女性别比1∶1。患者均根据临床症状、新斯的明试验、乙酰胆碱受体抗体、重频刺激试验、肌电图和胸部CT确诊为MG，排除其他自身免疫性疾病、严重感染、严重器官不全等患者，未服或仅服溴吡斯的明片。健康对照组选取体检人员10例（无自身免疫性疾病、严重感染及未服用激素或免疫抑制剂等），年龄14～55(30.4±12.2)岁，男女性别比例1∶1。
2.实验方法
采用qRT-PCR、Western blot检测健康对照组及MG患者组PBMC中α7nAChR的表达情况，使用ELISA检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12的表达水平；对MG患者PBMC进行T细胞活化处理，实验分为3组：空白对照组、α7nAChR拮抗剂组、α7nAChR激动剂组，培养72h，采用流式细胞术检测3组T细胞亚群的增殖情况及ELISA检测上清液IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12的分泌水平。
3.统计学方法
应用SPSS21.0进行数据分析，采用t检验比较健康对照组和MG患者组α7nAChR的表达情况，应用单因素方差分析及LSD-t检验比较3组之间α7nAChR对T细胞亚群增殖及相关细胞因子的表达，检验水准α=0.05。
结果：
与健康对照组相比，MG患者组α7nAChR mRNA及蛋白表达显著降低，IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-12表达水平显著升高（P均＜0.001），IL-4和IL-10表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）；在进一步实验中，与空白对照组相比，α7nAChR拮抗剂组促进T细胞亚群增殖，IFN-γ、TNF-α、IL-6表达水平升高（P均＜0.05），而α7nAChR激动剂组抑制T细胞亚群增殖，IFN-γ、TNF-α、IL-6表达水平降低（P均＜0.05）；与空白对照组相比，在α7nAChR拮抗/激活组中，IL-4、IL-10、IL-12表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
1.本研究将NNCS中α7nAChR与重症肌无力联系起来，发现α7nAChR在MG患者外周血表达水平存在差异。
2.研究发现α7nAChR在MG患者外周T细胞中具有调节作用，因此，可能为MG的发病研究提供一个新的视角。
重症肌无力（Myasthenia gravis,MG）是一种由乙酰胆碱受体（Acetylcholine receptor,AChR）抗体介导的、T细胞参与的自身免疫性疾病。目前治疗方法主要包括药物治疗及胸腺切除，但发病机制尚未明确。非神经元型胆碱能系统（Non-neuronal cholinergic system,NNCS）是一种存在于淋巴细胞、内皮细胞等细胞中完整的、独立的胆碱能系统，包括毒蕈碱型受体(mAChR,M1～M5)、烟碱型受体(nAChR,α1～α10、β1～β4、γ)、合成乙酰胆碱的胆碱乙酰转移酶以及分解ACh的乙酰胆碱酯酶等。目前已经证实该系统在免疫细胞上表达且通过自分泌/旁分泌调节免疫反应。α7nAChR作为非神经元型胆碱能系统的重要组分，其作用也是举足轻重的。据文献报道，激活α7nAChR可增强T淋巴细胞的免疫抑制功能，并且α7nAChR在多种疾病中发挥重要调控作用，比如类风湿性关节炎、肺癌、胃癌等等，由此可见，α7nAChR在炎症反应中发挥重要的作用。但是，关于α7nAChR在MG发病中的作用机制尚不明确，本研究主要通过检测MG患者外周单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中α7nAChR的表达，并在T细胞活化的基础上，进行α7nAChR拮抗/激活干预，对α7nAChR调节T细胞增殖及相关细胞因子的表达进行探讨，为后续研究其作用机制奠定基础。
方法：
1.一般资料
选取2018年9月～2019年3月郑州大学第二附属医院和河南省人民医院MG患者共10例，年龄9～63(31.2±15.4)岁，男女性别比1∶1。患者均根据临床症状、新斯的明试验、乙酰胆碱受体抗体、重频刺激试验、肌电图和胸部CT确诊为MG，排除其他自身免疫性疾病、严重感染、严重器官不全等患者，未服或仅服溴吡斯的明片。健康对照组选取体检人员10例（无自身免疫性疾病、严重感染及未服用激素或免疫抑制剂等），年龄14～55(30.4±12.2)岁，男女性别比例1∶1。
2.实验方法
采用qRT-PCR、Western blot检测健康对照组及MG患者组PBMC中α7nAChR的表达情况，使用ELISA检测血清中IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12的表达水平；对MG患者PBMC进行T细胞活化处理，实验分为3组：空白对照组、α7nAChR拮抗剂组、α7nAChR激动剂组，培养72h，采用流式细胞术检测3组T细胞亚群的增殖情况及ELISA检测上清液IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10和IL-12的分泌水平。
3.统计学方法
应用SPSS21.0进行数据分析，采用t检验比较健康对照组和MG患者组α7nAChR的表达情况，应用单因素方差分析及LSD-t检验比较3组之间α7nAChR对T细胞亚群增殖及相关细胞因子的表达，检验水准α=0.05。
结果：
与健康对照组相比，MG患者组α7nAChR mRNA及蛋白表达显著降低，IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-12表达水平显著升高（P均＜0.001），IL-4和IL-10表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）；在进一步实验中，与空白对照组相比，α7nAChR拮抗剂组促进T细胞亚群增殖，IFN-γ、TNF-α、IL-6表达水平升高（P均＜0.05），而α7nAChR激动剂组抑制T细胞亚群增殖，IFN-γ、TNF-α、IL-6表达水平降低（P均＜0.05）；与空白对照组相比，在α7nAChR拮抗/激活组中，IL-4、IL-10、IL-12表达水平差异均无统计学意义（P＞0.05）。
结论：
1.本研究将NNCS中α7nAChR与重症肌无力联系起来，发现α7nAChR在MG患者外周血表达水平存在差异。
2.研究发现α7nAChR在MG患者外周T细胞中具有调节作用，因此，可能为MG的发病研究提供一个新的视角。