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目的了解端粒长度在获得性再生障碍性贫血(acquired aplastic anemia,简称“再障”,AA)患者中的变化及shelterin复合体(TRF1, TRF2, POT1, TIN2, TPP1和RAP1) mRNA表达情况,寻找AA端粒缩短的原因,探讨端粒异常诱导AA发病的途径。方法研究对象为天津医科大学总医院自2011年5月至2012年5月,明确诊断的SAA患者27例,其中初治者9例,ATG治疗后恢复者18例,正常对照15名。采用免疫磁珠法分离CD3+T细胞,Southern杂交法检测端粒长度,并与临床指标进行相关性分析；荧光定量PCR法检测Shelterin复合体各基因表达情况；体外实验部分以初治SAA患者血清,TNF-α和IFN-γ分别干预培养正常人骨髓单个核细胞(BMMNC),采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,荧光定量PCR法检测POT1基因表达情况,western杂交法检测ATR、磷酸化ATR及磷酸化的ATM/ATR底物蛋白表达水平。结果第一部分CD3+T细胞端粒长度在SAA初治组为(4.42+1.13)kb, ATG治疗后恢复组为(5.82+0.97)kb,对照组为(9.18+3.31)kb。初治组与恢复组CD3+T细胞端粒长度无显著性差异,均较正常对照组缩短(P均<0.05)。其中端粒长度短于5kb者,在初治组为77.8%,恢复组为12.5%。SAA患者CD3+T细胞端粒长度与TH/s(T辅助/T抑制)呈显著正相关,与获取实验标本时,不输血状态下患者血红蛋白水平、白细胞计数、血小板计数、网织红细胞比例,白细胞恢复时间,ATG治疗后至少一系骨髓细胞开始恢复时间进行相关性分析,均无显著相关性(P>0.05)。外周血白细胞(PWBC)端粒长度在SAA初治组为(4.89+1.66)kb,ATG治疗后恢复组为(7.04+1.47)kb,对照组为(11.65+5.55)kb。初治组与恢复组PWBC细胞端粒长度无显著性差异,但均较正常对照组缩短(p均<0.05)。SAA患者PWBC端粒长度与T细胞亚群呈显著正相关,与获取实验标本时,不输血状态下患者血红蛋白、血小板数值及网织红细胞比例,呈显著正相关(P均<0.05)；与当时白细胞计数,淋巴细胞计数,及白细胞恢复时间,ATG治疗后至少一系骨髓细胞开始恢复时间,三系骨髓细胞恢复时间,无显著相关性(P均>0.05)。第二部分Shelterin复合体核心蛋白(TRF1、TRF2、TIN2、POT1、TPP1和RAP1) mRNA相对表达量检测显示：SAA患者CD3+T细胞中TRF1、TRF2、TIN2、 TPP1在初治组、恢复组、及对照组mRNA表达均无显著性差异。POT1在初治组相对表达量(0.16(0.02-0.29))显著低于恢复组(1.17(0.82-1.86))(P<0.05),上述两组与对照组相比差异无显著性。RAP1在初治组相对表达量(4.14(1.93-6.92))显著高于恢复组(0.87(0.30-1.73))和对照组(0.62(0.45-4.07)),恢复组与对照组间差异无显著性。PWBC细胞中,POT1基因nRNA相对表达量初治组(0.29(0.09-0.58))显著低于恢复组(0.78(0.22-2.69))和对照组(1.88(0.93-3.81)),而TRF1、TRF2、TIN2、TPP1、RAP1在各组间比较mRNA相对表达量无显著性差异。第三部分体外分别以SAA患者血清、]TNF-α和IFN-γ干预培养正常人BMMNC,流式细胞术分析细胞凋亡率,结果显示：胎牛血清培养组BMMNC总凋亡率为,(9.85+2.67),SAA血清培养组BMMNC总凋亡率为(13.88+4.55),配对t检验发现正常BMMNC在SAA血清中培养凋亡率明显增高。ATR系列蛋白检测中发现：胎牛血清培养组,BMMNC总ATR、磷酸化ATR及磷酸化的ATM/ATR底物蛋白低表达或不表达；但AA血清培养组、TNF-α和IFN-y培养组中BMMNC总ATR、磷酸化ATR、及磷酸化的ATM/ATR底物蛋白表达量明显增加。且上述蛋白表达量随TNF-α浓度增高,呈上升趋势。结论1.SAA患者发病时存在CD3+T细胞和PWBC的端粒缩短,且与TH/S呈显著正相关,提示AA患者血细胞端粒长度与疾病的免疫状态密切相关。2.初治SAA患者CD3+T细胞RAP1mRNA相对表达量显著高于恢复组和对照组,考虑与T淋巴细胞在疾病早期过度增殖有关。无论CD3+T细胞还是PWBC在初治组POT1mRNA相对表达量均显著减低,考虑与启动细胞凋亡相关。3.SAA血清中的TNF-α和IFN-γ成分可通过抑制POT1基因表达,启动ATR途径,诱导正常BMMNC凋亡,最终导致AA发病。