[目的]基于肾虚血瘀是影响妊娠情况的常见病机之一,本研究通过复制肾虚血瘀大鼠模型,观察助孕Ⅰ号方孕前直肠给药对孕后肾虚血瘀模型大鼠血液流变学、子宫蜕膜病理组织学的影响,用药后大鼠一般情况的改善以及各组大鼠发现阴栓或精虫后第八天的妊娠情况,探讨助孕Ⅰ号方改善妊娠情况的机理。为助孕Ⅰ号方的临床疗效提供实验室依据,为进一步的实验研究奠定基础。[方法]将普通级SD雌性大鼠60只常规喂养一周,进行阴道涂片判定雌鼠的动情周期。选择动情前期为入组标准,称重编号,按完全随机法将同一批动情前期的大鼠分为6组,直至60只大鼠筛选分组完毕,每组各10只,即空白组、模型组、阳性药物对照组(五子组和丹参组)、助孕Ⅰ号方高剂量组(14.6g生药/kg)和助孕Ⅰ号方低剂量组(7.3g生药/kg)。除空白组外,每组大鼠均采用羟基脲450mg/(kg · d)灌胃,每日一次,连续10天;第四天开始肾上腺素0.3ma/(kg · d)皮下注射,每日一次,连续7天,造成肾虚血瘀模型,空白组大鼠每日同时间给予生理盐水5mL/kg灌胃10天,第四天开始加用生理盐水2mL/kg皮下注射连续7天。造模的同时,助孕Ⅰ号方高剂量组大鼠给予助孕Ⅰ号方高剂量浓缩浸膏(14.6g生药/kg)灌肠治疗;助孕Ⅰ号方低剂量组大鼠给予助孕Ⅰ号方低剂量浓缩浸膏(7.3g生药/kg)灌肠治疗;五子组大鼠给予五子衍宗丸混悬液(0.5g生药/kg)灌胃治疗;丹参组大鼠给予复方丹参片混悬液(0.45g生药/kg)灌胃治疗;空白组及模型组大鼠给予生理盐水5mL/kg灌肠治疗。造模结束后,各组大鼠通过阴道分泌物涂片筛选出处于动情期的雌鼠,以雌雄2:1的比例合笼,以次晨发现阴栓或精虫计为妊娠第一天。每组大鼠给药至妊娠前一天,妊娠后自由饮食,分笼饲养至妊娠第8天,观察大鼠精神、活动、耐力、大便及和舌质等一般情况,取股动脉血3ml后脱颈椎处死,取出子宫组织,称重后放入中性甲醛中固定,观察各组大鼠子宫、胚泡形态及胚泡着床数,计算各组大鼠妊娠率。各组随机选取6只动物的血液和子宫组织标本送检。通过全自动血液流变仪检测各组大鼠妊娠第8天的血液流变学状态;通过免疫组化法检测各组大鼠妊娠第8天子宫蜕膜组织中VEGF、FLK-1、ES的蛋白表达情况,以及子宫蜕膜间质组织中螺旋血管的数量。[结果]1.药物对大鼠妊娠早期一般情况的影响与空白组相比,模型组大鼠的精神、活动、耐力、大便及和舌质等一般情况普遍较差;与模型组相比,阳性药物对照组(五子组、丹参组)、助孕Ⅰ号方高、低剂量组大鼠的一般情况均得到一定程度的改善。提示,助孕Ⅰ号方能改善肾虚血瘀模型大鼠的一般情况,对肾虚血瘀症状有明显的治疗作用。2.药物对大鼠发现阴栓后第8天妊娠情况的影响与空白组相比,模型组大鼠发现阴栓后第8天的妊娠率及胚泡着床数降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组相比,助孕Ⅰ号方高剂量组大鼠发现阴栓后第8天的妊娠率及胚泡着床数升高,差异有统计学意义(P<0.05);助孕Ⅰ号方低剂量组、五子组、丹参组大鼠妊娠率及胚泡着床数有升高的趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。提示,助孕Ⅰ号方能有效改善肾虚血疲模型大鼠的早期妊娠情况。3.药物对大鼠妊娠早期血液流变学的影响与空白组相比,模型组大鼠血液流变学各值显著升高(红细胞变形指数显著降低),差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,阳性药物对照组(五子组、丹参组)、助孕Ⅰ号方高、低剂量组大鼠的血液流变学各值均降低或显著降低(红细胞变形指数升高或显著升高),差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。此外,助孕Ⅰ号方高剂量组大鼠血液流变学部分指标低于或显著低于五子组或丹参组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。提示,助孕Ⅰ号方能改善肾虚血瘀模型大鼠血液流变学各指标。其中助孕Ⅰ号方高剂量对改善血液流变学部分指标的疗效优于五子衍宗丸或复方丹参片。4.药物对大鼠妊娠早期子宫蜕膜间质组织中螺旋血管数量的影响与空白组相比,模型组大鼠子宫蜕膜间质组织中螺旋血管数量显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,药物干预组大鼠子宫蜕膜间质组织中螺旋血管数量增高或显著增高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。此外,助孕Ⅰ号方高剂量组大鼠子宫蜕膜间质组织中螺旋血管数量有多于丹参组、少于空白组的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。提示,助孕Ⅰ号方能增加肾虚血瘀模型大鼠子宫蜕膜间质组织中螺旋血管的数量,且助孕Ⅰ号方高剂量的疗效有优于复方丹参片的趋势。5.药物对大鼠妊娠早期子宫蜕膜组织中血供相关因子(VEGF、FLK-1、ES)含量的影响与空白组比较,模型组大鼠子宫蜕膜组织中VEGF、FLK-1的含量均显著降低,ES的含量显著增高,VEGF与ES的含量之比显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01);助孕Ⅰ号方低剂量组大鼠子宫蜕膜组织中VEGF的含量显著降低,ES的含量显著增高,VEGF与ES的含量之比显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,助孕Ⅰ号方高剂量组、丹参组大鼠子宫蜕膜组织中VEGF、FLK-1的含量增高或显著增高,ES的含量显著降低,VEGF与ES的含量之比增高或显著增高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);助孕Ⅰ号方低剂量组大鼠子宫蜕膜组织中VEGF、FLK-1的含量有增高的趋势,ES的含量有降低的趋势,VEGF与ES的含量之比有增高的趋势,但差异均无统计学意义(P>0.05);五子组大鼠子宫蜕膜组织中VEGF的含量升高,ES的含量显著降低,VEGF与ES的含量之比升高或显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),FLK-1的含量有升高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。说明,助孕Ⅰ号方高剂量能明显改善肾虚血瘀模型大鼠子宫蜕膜组织中血供相关因子的表达。6.各组大鼠妊娠早期子宫蜕膜组织中螺旋血管数量与VEGF、FLK-1、ES含量的相关性各组大鼠妊娠早期子宫蜕膜组织中螺旋血管血量与VEGF的含量呈直线正相关,与ES的含量呈直线负相关,与FLK-1的含量不具有直线相关性。[结论]1.助孕Ⅰ号方高剂量孕前直肠给药能明显增加肾虚血疲模型大鼠的妊娠率及胚泡着床数,有效改善其早期妊娠情况。其作用机制可能为:助孕Ⅰ号方高剂量孕前直肠给药改善了肾虚血瘀模型大鼠妊娠早期子宫蜕膜的血流灌注情况,丰富了子宫、胎盘组织的血液供应,为胚胎的生长发育提供所需的营养物质,从而达到改善早期妊娠的目的。具体表现在以下两个方面:(1)助孕Ⅰ号方孕前直肠给药可明显改善肾虚血瘀模型大鼠妊娠早期血液流变学的各项指标,减轻血液的浓、粘、凝、聚状况,提高螺旋血管的有效血容量,从而改善子宫蜕膜组织的血流灌注情况。(2)助孕Ⅰ号方孕前直肠给药能增加肾虚血瘀模型大鼠妊娠早期子宫蜕膜间质组织中螺旋血管的数量,从而改善子宫蜕膜组织的血流灌注情况。2.助孕Ⅰ号方孕前直肠给药增加肾虚血瘀模型大鼠妊娠早期子宫蜕膜间质组织中螺旋血管数量的机制可能为:助孕Ⅰ号方高剂量能提高子宫蜕膜组织中VEGF、FLK-1的阳性表达率,并激活VEGF/FLK-1通路;同时降低ES的表达,从而削弱ES对VEGF、FLK-1的抑制作用,使得VEGF、FLK-1能充分有效结合,促进VEGF介导其下游信号通路,诱导新血管的形成。由此促进了子宫蜕膜组织中血管内皮细胞的增殖及螺旋血管的生成。