番茄耐热种质资源的筛选及苗期耐热相关基因的分离

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番茄(Lycopersicon esculentum Mill)是最重要的蔬菜作物之一,在人们生活中占有重要的地位。番茄是喜温植物,但不耐高温。长期高温逆境下生长,常伴随着产量、抗逆性、抗病性下降和商品性差等现象的发生。随着全球温室效应的增加,气候逐渐变暖,番茄耐热育种越来越受到了人们的重视,番茄耐高温研究已经成为当前番茄研究的一个热点。本文以10份番茄为材料,通过统计高温胁迫下坐果率筛选出耐热番茄和热敏感番茄各2份。测定这4份番茄材料的电解质渗透率和叶绿素荧光参数,筛选番茄耐热性鉴定指标;并通过cDNA-AFLP技术分离耐热相关基因,为番茄苗期耐高温研究奠定了基础,为番茄耐高温育种提供了理论依据。本论文的研究内容及结果如下:1、高温会造成花粉活力下降,从而影响授粉不良,受精过程紊乱,产生畸形果,甚至落花落果。因此,本实验通过统计高温胁迫下的番茄坐果率来衡量番茄高温耐受能力。本实验于2009年6-8月在浙江省农业科学院杨渡试验基地的温室大棚内进行。统计10份番茄材料不同时期的坐果率,发现’CLN-2413R’和‘05-161F2-1-13-0-0-0’坐果率较高,高于50%;而‘9246’和‘9185’坐果率较低,低于1%。坐果率与番茄的耐热性成显著正相关。2、以耐热番茄’CLN-2413R’、’05-161F2-1-13-0-0-0’和热敏感番茄‘9246’、‘9185’为材料,通过测定高温胁迫下苗期番茄电解质渗透率(EC)和相对电解质渗透率(EC%),并与高温胁迫下番茄坐果率进行相关性分析,发现高温胁迫下电解质渗透率(EC)与坐果率成显著负相关(|R|>0.95),较适合作为苗期番茄耐热性鉴定指标。3、利用FM-2便携式荧光仪测定上述4份番茄材料在高温胁迫下的叶绿素荧光参数(Fv’/Fm’、ΦPSⅡ、qP、Fv/Fm、Fv/FO、ETR),并与高温胁迫下坐果率进行相关性分析,结果发现:Fv’/Fm’、qP、Fv/Fm、Fv/FO、ETR与高温胁迫下的坐果率相关系数达到0.9以上(|R|>0.9),即相关性显著,可以用来辅助番茄耐热性的鉴定。4、应用cDNA-AFLP技术研究了高温胁迫下耐热番茄’CLN-2413R’和热敏感番茄‘9246’苗期叶片基因差异表达情况,共分离出12条与耐热相关的基因(耐热番茄’CLN-2413R’:3条;热敏感番茄‘9246’:9条)。通过BLAST比对,4条基因与番茄热传导系数有关;1条基因与真核生物中的荧光素酶同源性较高;1条基因是番茄染色体上的序列;2条基因是番茄苹果酸酶的序列;其余4条基因BLAST比对与已知序列没有较高的同源性。并利用实时荧光定量PCR技术分析基因的差异表达情况,结果表明:高温胁迫后’CLN-2413R’的基因表达水平普遍高于‘9246’,说明经高温胁迫后’CLN-2413R’耐热基因能够大量表达以此适应高温逆境。
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