研究背景：在腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)患者中,非生理性的腹膜透析液长期作用于腹膜,会导致腹膜损伤,可使腹膜间皮细胞发生上皮-间质转分化即EMT(Epithelial-to-Mesenchymal Transition),从而进一步导致腹膜纤维化的发生,甚至进展为更加严重、病死率极高的包裹性腹膜硬化(encapsulating peritoneal sclerosis,EPS),其中涉及到的信号转导通路有TGF-β1/Smad通路、PI3-K/Akt/mTOR等。他莫昔芬,是一种选择性雌激素受体(selective estrogen receptor modulator, SERM)调节剂,已广泛应用于乳腺癌的治疗。同时,有许多临床研究发现他莫昔芬具有良好的抗纤维化作用,可有效治疗多种纤维化类疾病如特发性腹膜后纤维化及由腹膜透析导致的包裹性腹膜硬化。其机制研究热点主要聚焦在他莫昔芬可以抑制TGF-β1信号通路而抑制EMT和减少细胞外基质沉积(accumulation of extracellular matrix, ECM),从而起到抗纤维化作用。目的：通过细胞水平的研究,明确他莫昔芬可以抑制高糖诱导的腹膜间皮-间质转分化,探索他莫昔芬对于高糖诱导的腹膜间皮-间质转分化的可能信号转导分子机制。方法：取正常SD大鼠腹膜,原代培养腹膜间皮细胞,取第3-4代细胞用于研究。高糖干预部分：分为正常组、高糖处理组分为三组(30mM,60 mM,120 mM),分别处理24h提取RNA和72h提取蛋白。药物干预部分：(1)、60mM高糖诱导EMT,予0.5μM或2μM他莫昔芬处理72h提取蛋白；(2)、60mM高糖诱导EMT,予2μM他莫昔芬或同时予2μM ER-α阻断剂组处理1h提取蛋白和处理6h提取RNA;(3)、 60mM高糖诱导EMT,予2μM他莫昔芬或同时予1μM蛋白酶体抑制剂处理1h提取蛋白。蛋白免疫印迹分析(western blot analysis)E-cadherin、α-SMA、Smad2及其快速磷酸化水平、Smad3及其快速磷酸化水平、Smad4蛋白含量的变化,实时荧光定量PCR(Quantitative Real-Time PCR)检测TGF-β1、I型胶原蛋白(collagen-I)、纤连蛋白(fibronectin)、Smad2、Smad3、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor, CTGF)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(plasminogen activator inhibitor 1, PAI-1的)mRNA表达变化。结果：高糖处理后细胞呈现EMT及ECM改变,表现为：E-cadherin的表达量相较正常对照组明显下降,a-SMA的表达量明显升高,TGF-β1、collagen-Ⅰ、fibronectin的mRNA表达明显升高,且呈浓度相关性。他莫昔芬能够改善EMT表现,表现为E-cadherin表达回升,a-SMA表达下降,且呈浓度相关性。他莫昔芬可以降低高糖诱导的Smad2快速磷酸化水平即p-Smad2蛋白水平,抑制CTGF、PAI-1的mRNA的表达,此抑制作用可被ER-α阻断剂阻断。Smad3、p-Smad3及Smad4蛋白水平在他莫昔芬作用下未见明显改变。他莫昔芬本身不会对Smad2蛋白及其磷酸化水平和mRNA水平、CTGF和PAI-1的mRN A水平产生影响,但其对高糖诱导的细胞可明显降低快速磷酸化水平,降低CTGF、PAI-1的mRNA表达水平,蛋白酶体抑制剂可提升p-Smad2/3水平。结论：他莫昔芬可以抑制高糖诱导的EMT,在有效浓度范围内,其防治效果与剂量呈一定的正相关。他莫昔芬可以通过减少Smad2快速磷酸化蛋白水平而抑制TGF-β1/Smad信号通路,ER-a参与此抑制作用过程。在抑制TGF-β1/Smad信号通路中,他莫昔芬的作用可能是通过蛋白酶体途径降解p-Smad2蛋白。