小鼠新印记基因Peg14的分离鉴定及表达分析

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:suguoqing000
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印记基因是基因组中一小部分亲本来源特异性沉默的基因。目前,已经在小鼠中鉴定出的印记基因数量超过100个,其中多数基因是母本表达,少数为父本表达。2009年Kobayashi等利用孤雌生殖胚胎鉴定出第一个小鼠1号染色体上的父本表达印记基因Zdbf2,本课题根据印记基因通常成簇分布于染色体上这一特点,在Zdbf2基因邻近区域检索侯选印记的EST,并对其中的EST——CJ051953进行了分离、印记鉴定及表达分析。  在印记鉴定中,以C57BL/6J与ICR的杂交品系作为实验材料,采用基于SNP标记的RT-PCR直接测序法,直接分析了双亲等位基因的表达情况。印记分析结果表明CJ051953为父本优先表达的印记基因,其印记具有组织及发育阶段特异性,命名为Peg14(paternal expression gene14)。全胚胎原位杂交结果表明,较强的Peg14信号出现在小鼠E9.5天的菱脑、面部间充质、神经管及E11.5天的端脑、中脑和菱脑等组织。E12.5天组织切片原位杂交的结果显示,该基因在前脑、中脑、后脑和垂体中的信号较强,在脊髓及体节中相对较弱。此外,我们进一步利用全胚胎半定量RT-PCR法对该基因在胚胎发育中后期的表达情况进行了分析,结果显示, Peg14基因在发育的中后期持续性表达,其中,E9.5天表达水平最低,E11.5天表达量达到最高值。  这种在脑部集中的表达模式,以及在脑中的印记状态表明,Peg14基因可能在小鼠胚胎神经系统的发育中发挥重要作用。
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