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目的:探究超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星能否扩大免疫原性细胞死亡,达到杀肿瘤目的。方法:首先制备脂质体-微泡-多柔比星复合物(Mb Dox),了解其生物特性。接着利用LL/2和CT26细胞系进行超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星(Mb Dox+US)及相应对照处理,流式细胞术检测凋亡细胞数、细胞表面促凋亡转移钙网蛋白(CRT)和内质网相关蛋白二硫键异构酶ERp57;Western Blot检测翻译起始因子(e IF2-α)磷酸化水平(p-e IF2-α)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1);化学发光ATP检测试剂盒检测ATP含量,了解超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星(Mb Dox+US)能否引起免疫原性细胞死亡(ICD)。然后再将LL/2和CT26细胞系进行超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星(Mb Dox+US)及相应对照处理后,取其上清与树突状细胞(DCs)共培养,流式细胞术检测树突状细胞(DCs)成熟标志(CD80和CD86)及活化标志(INF-g)。并利用共聚焦显微镜观察荧光标记的多柔比星在肿瘤细胞及荷瘤小鼠体内各组织中分布情况。同时进行体内实验,利用同源C57BL/6小鼠或BCLB/c小鼠建模,皮下注射经不同形式处理的肿瘤细胞(105)作为预防性肿瘤疫苗,当再次接种同种肿瘤后,取其脾单核细胞进行细胞毒T淋巴细胞(CTLs)反应实验;取其血清进行Western Blot实验检测CT26肿瘤裂解产物的相关抗体;利用LL/2或者CT26裂解产物诱导脾单核细胞源性B淋巴细胞分泌抗体,酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测后者含量变化;流式细胞术检测脾单核细胞抗CD8抗体和抗INF-g抗体、分析表达INF-g的CD8+T细胞比例、表达CD25+和FOXP3+双阳性调节性T细胞(Tregs)细胞比例。了解超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星能否诱导免疫原性细胞死亡相关的免疫反应发生。最后建立肿瘤疫苗治疗模型,在免疫完全(同源C57BL/6和BALB/c)和免疫缺陷(BALB/c Nu/Nu)小鼠中观察LL/2和CT26肿瘤细胞生长情况,了解超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星能否介导抗肿瘤免疫反应。结果:本课题制备了多柔比星-脂质体-微泡复合体(Mb Dox),超声控制释放脂质体-微泡复合物中多柔比星(Mb Dox+US),检测其在LL/2和CT26肿瘤细胞和同源小鼠模型中是否诱导ICD。发现Mb Dox+US处理组能够提高多柔比星在肿瘤细胞细胞内的摄取和细胞核的积累;不管在体外实验还是体内实验,都能够扩大免疫原性细胞死亡。Mb Dox+US处理可以增加肿瘤细胞中细胞凋亡,内质网应激和DAMPs,进而扩大树突状细胞成熟。而且,在免疫完全小鼠和免疫缺陷小鼠中经Mb Dox+US处理均出现有效的杀肿瘤效应。同时,Mb Dox+US处理可以提高肿瘤组织中活化CD8+T细胞比例,减少Tregs细胞生成,也支持Mb Dox+US处理能够扩大ICD这一结果。结论:利用脂质体-微泡复合物超声控制释放ICD诱导剂进入细胞核能有效扩大ICD,达到治疗肿瘤的目的。