论文部分内容阅读
目的：以3月龄APP695V717I转基因小鼠为老年性痴呆(AD)实验动物模型,应用中药复方(还脑益聪方)有效组分进行早期干预,观察该模型行为学、病理形态、胆碱能系统、细胞凋亡及细胞凋亡相关凋控基因的变化,阐释还脑益聪方有效组分早期干预对AD模型的效应机制与作用环节,为AD的早期中医药防治提供实验依据。方法：取3月龄APPV717I转基因小鼠60只,雌雄各半。随机分为模型组、还脑益聪方有效组分大剂量组(按2.8g/kg·d给药)、还脑益聪方有效组分小剂量组(按1.4g/kg·d给药)及盐酸多奈哌齐阳性对照组(按0.65mg/kg·d给药),每组15只；遗传背景相同的非转基因小鼠15只作为空白组。各组实验药物稀释成相同体积药液灌胃给药,模型组和空白组给予等体积蒸馏水灌胃,均每日1次。连续灌胃6个月(至9月龄),采用Morris水迷宫空间探索实验及被动回避实验测试模型的学习记忆能力；苏木精-伊红(HE)染色后,光镜下观察海马形态学变化；TUNEL法检测海马CA1区凋亡细胞数量；免疫组化法检测海马CA1区抑制凋亡基因Bcl-2和促进凋亡基因Bax的表达及其比值；酶联免疫吸附试验(ELISA)测定皮层及海马中乙酰胆碱(Ach)、乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰转移酶(CHAT)的含量。结果：1.空间探索实验结果表明,还脑益聪方大、小剂量组及盐酸多奈哌齐组均可改善APP小鼠记忆功能,与模型组比较,还脑益聪方大剂量组及盐酸多奈哌齐组可增加小鼠中心区域游泳距离的百分比(P＜0.05)。2.被动回避实验结果表明,还脑益聪方大、小剂量组和盐酸多奈哌齐组均可明显改善APP小鼠记忆功能,延长被动电击的潜伏期,减少错误次数,与模型组比较有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。3.治疗后光镜下观察可见模型组小鼠海马细胞排列紊乱,神经元细胞明显减少,出现细胞死亡留下的空泡,胞浆染色减弱,核膜皱缩,胞核深染、固缩,细胞周围组织疏松、水肿,与周围组织有较大间隙,同时伴有大量的小胶质细胞增生。还脑益聪方大、小剂量组和盐酸多奈哌齐组小鼠海马细胞排列较整齐,神经元细胞较多,可见少量变性坏死细胞,细胞水肿较轻,小胶质细胞增生较少。4.与模型组比较,还脑益聪方大、小剂量组及盐酸多奈哌齐组均降低海马中AchE的含量,提高CHAT的含量(P＜0.05,P＜0.01),其中还脑益聪方大剂量组和盐酸多奈哌齐组均能提高海马中Ach的含量(P＜0.05),还脑益聪方小剂量组则无明显变化(P＞0.05)。与模型组比较,还脑益聪方大、小剂量组及盐酸多奈哌齐组均能提高皮层中Ach的含量(P＜0.05)。盐酸多奈哌齐组能降低AchE的含量(P＜0.05)；与模型组比较,还脑益聪方大、小剂量组AchE的含量虽有降低趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05)。与模型组比较,还脑益聪方大、小剂量组均能提高皮层CHAT的含量(P＜0.05),而盐酸多奈哌齐组无明显变化(P＞0.05)。5.与模型组比较,还脑益聪方大、小剂量组及盐酸多奈哌齐组均可减少小鼠海马CA1区细胞凋亡数量(P＜0.01,P＜0.05)；还脑益聪方大、小剂量组及盐酸多奈哌齐组均可上调Bcl-2表达,下调Bax表达,提高Bcl-2/Bax的比值,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。结论：早期应用还脑益聪方有效组分进行干预,可显著改善APP转基因小鼠AD模型的学习、记忆功能和脑组织病理形态学,其机制可能与保护皮层及海马胆碱能系统功能、抑制细胞凋亡有关。