目的:子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的发病率高,是生育期妇女的常见疾病。子宫内膜异位症虽然是良性疾病,却具有种植、浸润、转移等类似恶性肿瘤的生物学特点,其病因和发病机理仍不十分明确。目前医学界公认的是1921年Sampson提出的经血逆流致子宫内膜异位种植学说。该理论认为,月经期子宫内膜细胞及碎片逆流进入到腹腔中,在此种植生长,并不断发展为子宫内膜异位病灶[1]。但是,一些专家认为,几乎所有妇女都会发生经血逆流[2] ,但并非所有妇女都患内异症,因而推测,在经血逆流致内异症病灶形成的过程中,必然存在某些驱动因子。大量的研究证明,新生血管的形成为子宫内膜异位症的发生、发展奠定了基础[3]。midkine (MK)家族是一类新的肝素结合性生长因子,这个家族包含两个成员, midkine(MK)和pleiotrophin(PTN)。midkine家族是重要的促血管生长因子之一,能刺激血管内皮细胞增殖,对新生血管的形成具有明显的调控作用。肝细胞生长因子即HGF (hepatocyte growth factor,HGF)又称分散因子(scatter factor, SF)。科学家证实,人类和啮齿动物间质细胞产生的HGF/SF与受体c-met结合可以促进细胞有丝分裂、细胞迁移、细胞形态改变及可以促进血管生成等。本实验分别研究了midkine(MK)、pleiotrophin(PTN)、HGF/SF在子宫内膜异位症患者的表达及其意义,从而对子宫内膜异位症的发病机制进行深入的探讨。方法:病例组:选择2005年10月至2006年9月河北医科大学附属第二医院经开腹或腹腔镜切除,并经大体和病理检查确诊为子宫内膜异位症患者35例,年龄在22~50岁(按照美国生育学会1985修订的内异症分期标准( r-AFS)评分,其中I、II期10例,III期、IV期25例;其中增殖期19例,分泌期16例),取其异位和在位子宫内膜组织。其中20例(增殖期10例,分泌期10例)术前取外周血3-5ml,术中留取腹水3-5ml。对照组:为此期间因不孕症行腹腔镜检查、畸胎瘤、卵巢单纯囊肿行腹腔镜或开腹手术的患者的子宫内膜组织25例,其中增殖期12例,分泌期13例,术中肉眼及术后病理排除子宫内膜异位症。其中15例(增殖期6例,分泌期9例)术前取外周血3-5ml,术中留取腹水3-5ml。两组均月经规律,周期28~35天,无其他内分泌、免疫和代谢性疾病,手术前6个月内未应用激素类及免疫抑制剂类药物。所取在位和异位内膜组织,清洗血液后,迅速投入液氮中保存。所取静脉血和腹腔液,4℃下3000r/min离心10分钟,取上清液置-80℃冰箱待检。采用RT-PCR方法分别检测了MK、PTN、HGF/SF在子宫内膜异位症患者的在位内膜、异位内膜以及非Ems妇女子宫内膜中的表达及意义,同时采用了酶联免疫吸附法即ELISA法测定了HGF/SF在病例组和对照组腹水和外周血中的表达及其意义。采用SPSS14.0统计学软件进行统计。结果:1对照组子宫内膜组织、EMs研究组(EMs组)在位和异位子宫内膜组织经RT-PCR方法扩增后MK、PTN和HGF/SF mRNA的表达:⑴MK表达水平在对照组子宫内膜组织、研究组在位和异位子宫内膜组织分别为0.494±0.191、0.848±0.209、0.542±0.159。统计结果表明,研究组在位子宫内膜组织中MKmRNA表达水平明显高于对照组子宫内膜组织(p <0.01)以及研究组异位子宫内膜组织(p <0.05),差异有统计学意义。研究组异位子宫内膜组织midkine(MK) mRNA表达水平稍高于对照组子宫内膜组织,但p=0.32 >0.05,差异无统计学意义。⑵PTNmRNA表达水平在对照组子宫内膜组织、研究组在位和异位子宫内膜组织分别为0.301±0.096、0.697±0.347、0.368±0.094。统计结果表明,研究组在位子宫内膜组织中PTNmRNA表达水平明显高于对照组子宫内膜组织(p <0.01)以及研究组异位子宫内膜组织(p <0.05),差异有统计学意义。研究组异位子宫内膜组织PTNmRNA表达水平高于正常子宫内膜组织(p <0.05),差异有统计学意义。⑶研究组在位子宫内膜组织中HGF/SF mRNA表达水平(0.820±0.232)明显高于对照组子宫内膜组织(0.461±0.108),p <0.01差异有统计学意义。研究组异位子宫内膜组织HGF/SF mRNA表达水平(0.908±0.361)高于对照组正常子宫内膜组织(p <0.01),差异有统计学意义。研究组在位、异位子宫内膜组织中HGF/SF mRNA表达水平没有明显差异(p >0.05)。2 MK、PTN和HGF/SFmRNA在不同分期Ems患者子宫内膜中的表达:子宫内膜异位症在位内膜中MKmRNA、PTNmRNA、HGF/SFmRNA的表达水平与内异症的临床期别存在正相关。⑴MKmRNA在Ⅰ、Ⅱ期Ems患者组表达水平为0.665±0.134、Ⅲ、ⅣEms患者组的表达水平为0.922±0.189,相关系数γ=0.595, p=0.000且p <0.01。⑵PTN在Ⅰ、Ⅱ期Ems患者组表达水平为0.450±0.208,Ⅲ、ⅣEms患者组的表达水平为0.795±0.344,相关系数γ=0.488, p=0.003且p <0.01。⑶HGF/SF mRNA在Ⅰ、Ⅱ期Ems患者组表达水平为0.590±0.110,Ⅲ、ⅣEms患者组的表达水平为1.036±0.349,相关系数γ=0.683, p=0.000且p <0.01。3 MK、PTN、HGF/SFmRNA在不同月经周期子宫内膜中的表达:⑴EMs研究组增殖期、分泌期内膜MKmRNA的表达水平分别为0.835±0.228、0.864±0.190,t检验p=0.68, p>0.05差异无统计学意义;对照组内膜中,增殖期、分泌期内膜MKmRNA的表达水平分别为0.584±0.187、0.411±0.159 ,增殖期MKmRNA的表达水平高于分泌期,t检验p=0.021且p<0.05,差异有统计学意义。无论增生期或分泌期研究组在位内膜MKmRNA的表达水平均高于对照组子宫内膜,均p<0.05差异有统计学意义。⑵EMs研究组增殖期、分泌期内膜PTNmRNA的表达水平分别为0.663±0.250、0.736±0.441,t检验p=0.54, p>0.05差异无统计学意义;对照组内膜中,增殖期、分泌期内膜PTN mRNA的表达水平分别为0.290±0.089, 0.310±0.104,t检验p=0.60, p>0.05差异无统计学意义。无论增生期或分泌期研究组在位内膜PTNmRNA的表达水平均高于对照组子宫内膜,均p<0.05差异有统计学意义。⑶EMs研究组分泌期内膜HGF/SFmRNA的表达水平(1.064±0.381)高于增殖期(0.778±0.294), p=0.021且p <0.05,差异有统计学意义。对照组内膜中,增殖期、分泌期内膜HGF/SFmRNA的表达水平分别为0.415±0.115, 0.502±0.086,t检验p=0.043且p<0.05 ,差异有统计学意义。无论增生期或分泌期研究组在位内膜HGF/SFmRNA的表达水平均高于对照组子宫内膜,均p<0.05,差异有统计学意义。4 HGF/SF在腹水和外周血中的表达:⑴HGF/SF在腹水表达:EMs研究组腹水中HGF/SF的表达量(1.546±0.214ng/ml)明显高于对照组妇女(1.124±0.128 ng/ml),p<0.01差异有统计学意义。EMs I、II期患者组腹水中HGF/SF的表达量为1.355±0.239 ng/ml,EMsIII、IV期患者组腹水中HGF/SF的表达量为1.614±0.224 ng/ml,均高于对照组妇女(1.166±0.128 ng/ml),差异有统计学意义(p<0.05, p<0.01)。Ⅲ、ⅣEms患者组腹水中HGF/SF的表达水平高于Ⅰ、Ⅱ期Ems患者组,p=0.017且p<0.05差异有统计学意义。Ems患者腹水中HGF/SF表达量与EMs的严重程度正相关,相关系数γ=0.627, p=0.003且p <0.01有统计学意义。EMs研究组不同月经周期腹水中HGF/SF的表达:增生期为1.479±0.192 ng/ml,分泌期为1.614±0.224 ng/ml, p=0.166且p >0.05,差异无统计学意义。对照组增生期腹水中HGF/SF的表达为1.085±0.100 ng/ml,分泌期为1.151±0.144 ng/ml, p=0.313且p >0.05,差异无统计学意义。无论增生期或分泌期,EMs研究组腹水中HGF/SF的表达均高于相应期别对照组腹水中HGF/SF的表达,均p<0.01差异有统计学意义。⑵HGF/SF在EMs外周血中的表达:HGF/SF在EMs研究组外周血中的表达量(0.523±0.127 ng/ml)明显高于对照组妇女(0.258±0.065 ng/ml),p<0.01,差异有统计学意义。EMs I、II期患者组外周血中HGF/SF的表达量为0.431±0.104 ng/ml,EMsIII、IV期患者组外周血中HGF/SF的表达量为0.573±0.111ng/ml,均高于对照组妇女(0.258±0.065 ng/ml),均有p<0.05差异有统计学意义。Ⅲ、ⅣEms患者组腹水中HGF/SF的表达水平高于Ⅰ、Ⅱ期Ems患者组,p=0.014且p<0.05差异有统计学意义。外周血中HGF/SF与EMs的严重程度正相关,相关系数γ=0.518, p=0.019且p <0.05,有统计学意义。EMs研究组分泌期外周血中HGF/SF的表达(0.583±0.120 ng/ml)高于增生期(0.464±0.108 ng/ml)且p<0.05,差异有统计学意义。对照组分泌期外周血中HGF/SF的表达(0.285±0.054 ng/ml)高于增生期(0.217±0.060 ng/ml)且p<0.05,差异有统计学意义。EMs组腹腔液和血清HGF/SF正相关,相关系数γ=0.609, p=0.004且p <0.01。结论: 1 Ems患者在位内膜组织中MK、PTN、HGF/SFmRNA表达强度明显高于正常子宫内膜组织,这些都支持了“在位内膜决定论”这一新观点。2子宫内膜异位症在位内膜中MKmRNA、PTNmRNA、HGF/SF mRNA的表达水平与子宫内膜异位症的临床期别存在正相关。3无论在增殖期还是在分泌期, EMs患者在位内膜MK、PTN、HGF/SFmRNA的表达均显著高于相应期别的对照组内膜,提示EMs患者在位内膜的强血管生成能力贯穿于整个月经周期,从而使内异症病程迁延不愈。4 Ems患者腹水和外周血HGF/SF的表达量均高于对照组腹水和外周血其表达,证明腹腔和外周循环环境的变化在Ems的发生发展中可能起到重要作用。5 Ems患者腹水和外周血HGF/SF的表达与子宫内膜异位症的临床期别存在正相关,检测腹水和血清中的HGF/SF浓度可能有助于临床EMs的诊断及预后判断。6血管生成因子MK、PTN、HGF/SF在EMs的发生发展中可能起到十分重要的作用,探索MK、PTN、HGF/SF抑制剂在子宫内膜异位症治疗中的潜能将会有重大意义。