毛壳菌株的筛选鉴定以及抗菌物质发酵条件优化

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Spring_Song
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农业生产中每年因为农作物病虫害造成很多植物死亡或者减产,给我们的粮食生产带来十分巨大的损失。生物防治植物病虫害中具有持续时间长、防治效果显著、安全性好并且不使生物产生抗药性。因此,生物防治被认为是未来农业病虫害防治中主要的防治方法。毛壳菌是一种主要的生物防治菌,它具有作为很好的生物防治菌剂的能力。不仅可以通过竞争作用,重寄生作用,诱导植物产生抗性还可以产生抗菌物质抑制植物病原菌。本课题主要研究从特定环境土壤中筛选具有生物防治功能的毛壳菌,并初步研究其代谢物发酵条件。本实验,采用分离培养基从样品中筛选具有纤维素降解能力的微生物,通过在显微镜下观察微生物形态结构,筛选发现其中有8株是毛壳菌菌株分别为G12、G14、G15、H6、H10、I3、I4、I5。分子水平鉴定主要是通过ITS序列分析,鉴定微生物种属关系,发现八株菌株与球毛壳菌相似度高达94%以上。通过与病原菌对峙实验作为复筛,发现菌株H10对核盘菌、立枯丝核菌、尖孢镰刀菌均有较好的生物防治能力。而且其生长速度也相对较快,在28°C条件下,4d就能长满9cm的平板,在3d时候就开始有暗色的子囊壳产生。通过产酶培养基诱导,每天测毛壳菌H10菌株纤维素类酶活,发现28oC、170rpm条件下,培养2d酶活达到最大,其中滤纸酶活、外切葡聚糖酶活、内切葡聚糖酶活、β-葡萄糖苷酶活分别为0.55U、0.35U、0.47U、0.47U。接着通过在28°C、170rpm条件下,PDB液体发酵培养。经过研究发现,液体培养过程中菌体几乎不产生生殖结构,没有子囊壳、以及子囊孢子等结构的存在。推测可能是由于氧气量以及附着物的原因,造成菌丝无法产生生殖结构。进一步研究在不同的pH、温度条件下对代谢物抑菌能力的影响。将发酵液在0.1MPa,40°C下进行浓缩。研究发现,在初始pH为6.5时,抑菌率达到最大至47.32%。在发酵时间为13d,代谢物的抑菌能力最大至43.11%。研究还发现菌体量的大小对代谢物的产量也有影响。尽管本课题主要是基础研究,但是它扩大了生物防治的菌种资源,并且证实了球毛壳菌菌株H10具有成为优良生物防治菌种的潜力,为以后工业化生产生物防治菌剂奠定基础。
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