GC/MS法测定头发中多胺的含量

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目的多胺(Polyamines,PA)广泛存在于生物体内,是一种长链脂肪族化合物,主要包括腐胺(Putrescine,Put),精脒(Spermidine,Spd)和精胺(Spermine,Spm)。多胺与细胞增长和癌症密切相关,癌基因亦可调节多胺代谢。多年研究证明,临床多种癌症患者其体液中多胺浓度,尿液中排泄量及头发中多胺浓度均增加。多胺可作为肿瘤的生物学标志物已经成共识。本文中,用硅藻土柱对水溶液中的多胺进行固相提取,然后用正己烷与七氟丁酰氯(HFB-C1)的混合液洗脱,结果N-七氟丁酰化的多胺回收率良好。该方法集提取、衍生化、洗脱为一体,不仅简化了实验过程,而且缩短了分析时间。上述方法应用于以下头发样品的分析,取14个健康男性和22个健康女性的头发样品,GC/MS法检测头发中的多胺。方法在50mg头发样品中,加入固定的内标液和1mol/L的NaOH溶液,在95℃水浴中加热水解。冷却后加入浓盐酸调节pH<1,离心,提取上清液,再用5mol/L的NaOH调节pH约13.0,过硅藻土柱。用正己烷、乙酸丁酯和七氟丁酰氯(衍生化试剂,HFB-C1)的混合液洗脱。用N2吹至约30μl,进样1μl于GC/MS分析。结果三种多胺在5-1000 ng浓度范围内有良好的线性关系,精密度、回收率较好,多胺衍生化物在24 h内稳定性良好。腐胺,精脒,精胺和内标在设定的色谱质谱条件下得到很好的分离且没有明显的背景干扰峰。头发样品分析中,三种多胺都呈阳性,得出头发中多胺的正常值范围。从平均浓度来看,精脒含量最高,其次是腐胺,精胺;男性头发中的多胺均大于女性。讨论头发作为检测多胺的生物检材有很多优点,如头发是一种无创性生物样品,其组成成分稳定,受外在环境影响小,能反应长期慢性的生理状况,易于获得、储存和运输,不易受外部条件污染。最近,人们已经意识到头发作为无创性生物样品在生物医学领域中的价值。在我们的预实验中,酸性提取和碱性提取分别应用于同一个头发样品中的多胺分析。结果显示:当碱性提取用于头发前处理时,所得的多胺浓度要远远高于酸性提取下所得的多胺浓度水平。硅藻土属于亲水型填料,其作用原理为分配原理。硅藻土用量与上清液量需匹配,实验中使用的洗脱剂为正己烷。结论本文采用的对多胺进行七氟丁酰氯一步过柱衍生化法,优化了样品前处理过程,缩短了分析时间,提高了多胺的挥发性,提高了检测灵敏度。该方法使我们能更快更准确地同时检测头发样品中的腐胺、精脒和精胺,能在临床早期诊断和癌症预防方面有一定帮助作用。该方法还可用于其它生物检材中多胺的研究。
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