论文一 结直肠癌患者肠道UGT1A基因位点多态性表达的研究 研究背景:尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)是物质代谢Ⅱ相酶中的重要一员,可催化N-羟基化合物与葡萄糖醛酸结合,加速其代谢,阻止和降低杂环胺物质诱发DNA突变的发生。人类结肠呈现出最复杂的UGT1A基因位点的表达模式,UGTA8和UGT1A10主要表达于结肠、直肠,通过葡萄糖醛酸结合反应代谢杂环胺-DNA加成物,发挥基因保护作用,在结直肠防御化学性致癌物方面具有重要作用。基于UGT1A家族中各同功酶在致癌物代谢中的作用以及在人体内组织分布的特异性,我们思索:在结直肠癌患者的肠道粘膜UGT1A家族的基因表达是否有变化,酶蛋白的活性是否降低,这种变化是否存在个体差异,不同个体对致癌物的易感性不同是否是这种差异表达的结果。以往对UGT1A基因位点在结直肠癌患者肠道粘膜的调节表达研究罕见报道,我们旨在通过RT-PCR、Western-blotting、HPLC检测这种差异性的存在。 目的:从mRNA水平、蛋白质水平、细胞整体水平分析在结直肠癌病例组与正常人群结直肠粘膜中UGT1A基因位点的多态性表达,从而全新地揭示这种多态性表达在结直肠癌中的重要意义。 方法:结直肠癌病例组40例,其中结肠癌25例,直肠癌15例,正常人群肠道粘膜对照组20例,正常肝脏组织标本8例,结直肠癌病例组粘膜组织标本留取40个样本对,每对样本包括肿瘤组织及切除肠段的断端距肿瘤边缘20cm以上的正常肠粘膜组织。逆转录聚合酶链反应分析结直肠癌组、正常人群肠道粘膜、正常肝组织UGT1AmRNA表达,免疫印迹法检测各组UGT1A蛋白的表达,间接免疫荧光分析待检标本的UGT1A蛋白的荧光定位,高效液相色谱分析