【摘 要】
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对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)属线形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒属(Whispovirus),是一种环状双链DNA病毒,能感染对虾、螯虾等各种虾类。该病毒宿主
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对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus,WSSV)属线形病毒科(Nimaviridae)白斑病毒属(Whispovirus),是一种环状双链DNA病毒,能感染对虾、螯虾等各种虾类。该病毒宿主范围广,传染力强,致死率高,是养殖虾类的主要病原,但目前该病毒的对宿主细胞的侵染机制仍不清楚。本文通过不同的内吞抑制剂及内吞标志物,对WSSV进入造血组织细胞的途径进行了分析。此外,对红螯螯虾(Cherax quadricarinatus)造血组织细胞的网格蛋白轻链c DNA进行克隆,并制备得到了特异性的抗体。本研究有助于进一步对WSSV的感染机制进行深入地研究,并对虾养殖业中WSSV病害的防治提供了有益的借鉴和科学的依据。(1)借助相关的内吞途径抑制剂及内吞标志物,研究WSSV进入造血组织细胞的相关内吞途径。结果表明,网格蛋白抑制剂Chlorpromazine(CPZ)能有效地抑制WSSV侵染,并且与转铁蛋白及网格蛋白共定位,说明WSSV是通过网格蛋白介导的内吞途径进入造血组织细胞。此外,在内吞的过程中,需要dynamin和细胞膜上胆固醇的参与,并且需要经过酸化。(2)克隆得到红螯螯虾网格蛋白轻链的cDNA全长,并将其命名为CqCLC(Genbank登录号为KR075008)。进化树分析表明,其与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)的网格蛋白轻链进化距离较近。此外,在其蛋白序列中选择抗原性较好的片段合成多肽,并以此制备单克隆抗体,而后经免疫荧光和Western blot检测从中筛选出具有特异性的抗体
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