一、槲皮素对大鼠低氧肺动脉高压防治作用的研究目的：体内实验探讨槲皮素对低氧肺动脉高压的作用效果,为肺动脉高压治疗寻求新的方式及治疗靶点。方法：随机将30只雄性Sprague-Dawley大鼠分为常氧组、低氧组、低氧+槲皮素组,每组10只。持续4周后,在生理多导仪监视下,通过右心漂浮导管测定大鼠体循环压、右心室收缩压、右心室比重[右心室／(左心室+室间隔)],免疫组化检测各组大鼠肺小动脉中PCNA、Ki67以及TUNEL的表达变化。结果：槲皮素可显著缓解低氧肺动脉高压(P<0.05),逆转右心室肥厚以及肺血管重塑(P<0.05),并导致肺小动脉PASMCs增殖减少,凋亡增加。结论：槲皮素可有效促进大鼠PASMCs增殖减少、凋亡增加,缓解低氧肺血管重塑,逆转低氧肺动脉高压。二、槲皮素通过调控TrkA/AKT信号通路缓解低氧肺动脉高压目的：探讨槲皮素抑制低氧肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和诱导细胞凋亡从而缓解缺氧肺动脉高压的潜在的分子机制,为槲皮素治疗低氧肺动脉高压进一步提供理论基础。方法：分离、培养大鼠PASMC,在Oxycycler model C21低氧细胞培养箱中建立细胞低氧模型。MTT法检测槲皮素的IC50,流失细胞法检测槲皮素浓度梯度下细胞周期及凋亡细胞数,Western-blot检测周期蛋白及凋亡蛋白的变化；Tanswell实验检测槲皮素对低氧PASMCs迁移的影响;全组基因芯片筛选低氧PASMCs增殖、凋亡及迁移的相关调控基因变化。结果：槲皮素可显著缓解PH(P<0.05),逆转右心室肥厚以及肺血管重塑(P<0.05),并导致肺小动脉PASMCs增殖减少,凋亡增加：体外实验表明：槲皮素能有效抑制低氧PASMCs增殖,使其周期停滞在G1/G0期、促进其凋亡和迁移;此外,结果显示槲皮素能增加低氧PASMCs cyclin D1的表达,同时减少cyclin B1和Cdc2的表达;Western-blot结果显示槲皮素能逆转低氧所导致的BAX/Bcl-2的比率,同时减少MMP2、MMP9、CXCR4、integrin β1和integrin a 5的表达；全组基因芯片分析表明槲皮素调控低氧PASMCs增殖、凋亡、细胞周期停滞、以及迁移与酪氨酸受体激酶A (TrkA)相关；低氧激活TrkA/AKT信号通路,槲皮素可有效抑制该通路的激活,更为重要的是在加入TrkA受体激活剂NGF-β后,槲皮素对低氧PASMCs抑制增殖、细胞周期阻滞,促进其凋亡和抑制迁移的作用明显减弱。结论：槲皮素可能是通过抑制TrkA/AKT信号通路发挥抑制低氧PASMCs增殖、细胞周期阻滞,促进其凋亡和抑制其迁移从而缓解肺血管重塑,达到治疗肺动脉高压的目的。三、槲皮素通过FOX01依赖的信号通路激活自噬,抑制自噬后槲皮素促进低氧肺动脉平滑肌细胞凋亡增加目的：进一步深入探讨槲皮素缓解低氧肺动脉高压(PH)的分子机制,明确细胞自噬行为有无参与其中。方法：分离、培养大鼠PASMC,在Oxycycler model C21低氧细胞培养箱中建立细胞低氧模型。流式细胞术、Western Blot和TUNEL细胞免疫荧光评估槲皮素促凋亡;电镜、LC3细胞免疫荧光观察细胞处理前后自噬形态学变化;构建携带mRFP-GFP-LC3双荧光的慢病毒观察槲皮素对自噬流的影响；利用siRNA技术沉默FOXO1, SESN3,使用3MA抑制自噬,检测槲皮素对自噬以及自噬对低氧PASMC增殖的影响。最后建立Sprague-Dawley大鼠PH模型,在给予槲皮素的基础上抑制自噬,观察有无叠加效应。结果：槲皮素有效促进低氧PASMC凋亡并促进凋亡相关蛋白的表达。同时,槲皮素增加了低氧所激发的自噬以及上调自噬相关调控蛋白的表达,并增加自噬流的形成;槲皮素增加低氧FOXO1转录以及活性;抑制FOXO1表达后可有效增加mTOR以及其下游靶蛋白P70-S6K.4E-BPI的磷酸化,也明显削弱槲皮素增加低氧所激发的自噬;此外,我们观察到FOXO1通过上调SESN3表达来实现提高mTOR活性从而激发自噬的深入机制,抑制SESN3亦可有效抑制槲皮素所增强的自噬。最后,我们发现明显抑制自噬可增强槲皮素所介导的低氧PASMC凋亡,而且在给予槲皮素的基础上加上自噬抑制剂可增加槲皮素治疗PH的效果。结论：槲皮素可有效促进低氧PASMC凋亡从而缓解PAH,同时加剧了低氧所激发的自噬,抑制自噬后槲皮素对低氧肺动脉高压的防治效果明显增加,在槲皮素治疗低氧肺动脉高压的同时加用自噬抑制剂会获取更令人满意的效果。