【摘 要】
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试验采用BHK21细胞增殖口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),经PEG-6000沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心等方法提纯FMDV 146S,免疫动物,制备抗血清;通过饱和硫酸铵粗提
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试验采用BHK21细胞增殖口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV),经PEG-6000沉淀、差速离心和蔗糖密度梯度离心等方法提纯FMDV 146S,免疫动物,制备抗血清;通过饱和硫酸铵粗提、sephadex G-25除盐、DEAE-纤维素柱层析等提取IgG,包被灭菌的Eppendorf管捕获病毒;在FMDV的核苷酸序列相对保守区设计上下游引物FM1/FM4,扩增病毒的基因片段。从而建立了检测FMDV的抗原捕获反转录聚合酶链式反应(Antigen capture reverse transcriptase/polymerase chain reaction,AC-RT/PCR)诊断方法。经抗体包被效果、抗原捕获效果、抗体包被管存放期、敏感性和特异性、田间样品的检测等试验,结果表明:Eppendorf管经戊二醛固定和BSA封闭处理后可以提高抗体包被效果和捕获抗原效果;抗体包被管放置室温过夜或放置室温1月后仍具有捕获抗原的能力;与常规RT/PCR比较具有相同的敏感性,可检出0.1LD50的病毒量;特异性高于常规RT/PCR,并可对口蹄疫病毒直接定型。 本试验采用一步RT/PCR方法,全部反应在同一个Eppendorf管中进行,减少了操作过程中的污染,简化了试验程序,适宜于口蹄疫大批量样品的检测。
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