亚稀褶黑菇的生物学特性及其毒性研究

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利用菌种分离技术、光镜技术、电镜技术、高效液相色谱技术、毒理实验技术、电泳方法等对亚稀褶黑菇(Russula subnigricans Hongo)的生物学特性和毒性机理进行了研究,主要包括以下内容:亚稀褶黑菇的生态学和组织学研究、菌种分离培养、扫描电镜观察、成分分析、粗毒液诱导小自鼠肝肾细胞凋亡,小白鼠中毒后肝肾细胞透射电镜观察,研究结果如下: 1.通过野外生态调查和利用扫描电镜对亚稀褶黑菇进行了生态学和组织学研究。亚稀褶黑菇是一种外生菌根菌,在相对稳定的生态环境条件下,平均温度24~32℃,相对湿度50~80%,降雨量(土壤含水量)30%以上,均有亚稀褶黑菇发生,湿度是主导因子。每年在夏末秋初高温阵雨之后为发生盛期。发生地林间郁闭度0.9左右,土壤pH值5.75,其共生树种以壳斗科为主。亚稀褶黑菇菌髓为异型菌髓,担孢子近球形或球状卵形,有小刺,6.3~8.1μm×5.4~7.2μm(Lm=7.1),菌褶菌丝无锁状联合,囊状体特别发达。 2.以四因素三水平的正交试验设计培养条件,pH5.6,26.2℃,45d,对亚稀褶黑菇菌丝体进行固体培养。通过对菌丝体直径的测定及分析,优化筛选出亚稀褶黑菇菌种培养的最适培养基:(NH42HPO4 1g/1000mL,甘露糖15g/1000mL,KH2PO4 0.5g/1000mL,维生素B1 100μg/1000mL,并证明氮源为其生长的最重要营养因素。 3.除色氨酸被盐酸水解破坏而未检出外,亚稀褶黑菇蛋白中含有16种氨基酸,9种必需氨基酸,其氨基酸的总含量达179.652μg/mg,总必需氨基酸含量为63.546μg/mg,必需氨基酸含量占总含量的35.37%,亚稀褶黑菇中可溶性糖含量为2.93%,粗纤维含量为7.55%,维生素C0.1484mg/100g,烟酸0.1096mg/100g,维生素B1 0.0586mg/100g,维生素B2 0.0096mg/100g,粗毒液中含有微量的α-鹅膏毒肽。 4.用电泳技术研究亚稀褶黑菇粗毒液诱导小白鼠肝肾细胞凋亡,小白鼠亚稀褶黑菇抽提液中毒后,肝肾细胞.DNA经琼脂糖凝胶电泳出现180一200bp整数倍的oNA梯形带,19.09/L一28.59/L范围内,亚稀褶黑菇提取液诱导肝肾细胞凋亡表现出时间和剂量依赖性.亚稀褶黑菇提取液能诱导小白鼠肝肾细胞凋亡,亚稀褶黑菇提取液诱导肝肾细胞凋亡是亚稀褶黑菇中毒后机体病变死亡的重要表现形式之一 5.用透射电镜较细致地观察了小白鼠亚稀褶黑菇粗毒液中毒后的肝肾病理变化,亚稀褶黑菇毒素主要损害肾脏,引起肾细胞核核膜肿胀,线粒体肿胀,溶酶体增多,肾细胞坏死.对小白鼠用亚稀褶黑菇粗毒液进行毒性试验,测定了亚稀褶黑菇的半致死剂量LDS。值为2当82.lmg/kg。
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