论文部分内容阅读
目的:本研究通过体外培养Wistar大鼠肺成纤维细胞，采用RT-PCR方法测定肺成纤维细胞细胞间黏附分子ICAM-1mRNA及Western blot方法测定NF-κB p65表达水平的变化，探讨促炎因子IL-1β对肺成纤维细胞表达细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)的信号转导通路。
方法:采用组织切块法培养大鼠胚肺成纤维细胞:取第5～6代形态、结构一致贴壁生长的肺成纤维细胞进行实验。将实验分为三组:①对照组:将肺成纤维细胞应用单纯的DMEM培养液培养6h;②白细胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）组:将肺成纤维细胞中置入含IL-1β(15ng/ml)的DMEM培养液培养6h;③吡咯烷二硫氨基甲酸盐（pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC）组:首先将肺成纤维细胞应用PDTC100nmol/ml预处理20分钟，然后再置入含IL-1β(15ng/ml)的DMEM培养液培养6h。
RT-PCR法测定肺成纤维细胞中ICAM-1 mRNA表达水平，WesternBlot蛋白免疫印迹法测定肺成纤维细胞中NF-κB p65蛋白的活化，以上各组实验重复6次。
结果:
1.RT-PCR法检测肺成纤维细胞ICAM-1 mRNA的浓度/水平变化各实验组均在234bp处出现了特异性的ICAM-1 mRNA条带，576bp处出现了内参Ratβ-actin的特异片段。ICAM-1mRNA电泳条带的光密度扫描显示，对照组有一定量的ICAM-1mRNA基础表达，水平甚低（0.265±0.079）。与对照组相比，IL-1β组和PDTC组ICAM-1mRNA的表达量均明显升高（0.870±0.108、0.504±0.075，P＜0.01），PDTC组的升高水平明显低于与IL-1β组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。
2.应用Western Blot方法检测肺成纤维细胞NF-κB p65的变化Western blot分析显示，NF-κB p65蛋白表达在65KD的位置上出现一条杂交带。与对照组相比，IL-1β组、PDTC组NF-κB p65蛋白的相对含量均增高，差异具有统计学意义（0.460±0.061、1.22±0.179、0.711±0.112，P均＜0.01）;并且PDTC组NF-κB p65蛋白的相对含量低于IL-1β组，差异具有统计学意义(P＜0.01)。
结论:
1.IL-1β诱导大鼠肺成纤维细胞ICAM-1 mRNA的表达增高，2吡咯烷二硫氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)可抑制IL-1β对肺成纤维细胞表达ICAM-1 mRNA。
3.IL-1β可诱导肺成纤维细胞核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)的活化。
4.PDTC通过阻断细胞内NF-κB通路的活化，而抑制IL-1β上调肺成纤维细胞表达ICAM-1 mRNA的作用。