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目的:探究PSGL-1通过炎症反应在小鼠盐敏感性高血压发生发展中的作用及分子机制。方法:体内实验:将PSGL-1基因敲除(PSGL-1-/-)小鼠及其野生型(PSGL-1+/+)小鼠,分别给予高盐(6%NaCl)和正常盐(0.4%NaCl)喂养三个月,麻醉状态下颈总动脉插管测量小鼠血压,利用流式细胞术、免疫组化、免疫荧光、Elisa和免疫印迹方法检测小鼠组织中炎症反应、血管功能和肾脏损伤情况;体外实验一:分别提取PSGL-1+/+和PSGL-1-/-小鼠的外周血单个核细胞(PBMC),并用BCECF-AM探针染色。小鼠脑微血管内皮细胞单层分别给予130 mM和170 mM NaCl刺激三小时后,加入探针标记的PBMC细胞共孵育三十分钟,用倒置荧光显微镜拍照对比各组荧光强度,即代表PBMC粘附数量;体外实验二:提取小鼠外周血单个核细胞,分别在130 mM和170 mMNaCl浓度环境中与小鼠P-selectin重组蛋白共孵育,用流式细胞术检测与P-selectin重组蛋白结合的外周血单个核细胞的比例;体外实验三:将小鼠脑微血管内皮细胞(Bend.3)分别于130mMNaCl、170mM NaCl、170 mMNaCl+NF-KB抑制剂(PDTC)环境中处理48-72小时后,用Western Blot方法检测细胞中P-selectin、E-selectin、VCAM-1、ET-1等粘附分子的表达量,以观察高盐是否通过NF-κB信号通路影响内皮细胞粘附分子的表达。结果:体内实验:与正常盐饮食小鼠比较,高盐诱导的PSGL-1+/+小鼠血压明显升高,同时伴有皮肤小血管、主动脉及肾脏组织中T淋巴细胞和巨噬细胞浸润,血管内皮eNOS和ET-1表达异常、血管舒张功能受损,以及肾脏损伤的标志蛋白结缔组织生长因子(Connective Tissue Growth Factor,CTGF)、氧化应激反应标志蛋白NADPH氧化酶4型(NADPH oxidase 4,NOX4)表达量增加(P<0.05);而PSGL-1-/-小鼠高盐饮食后无明显的炎症细胞浸润、血管舒张功能损伤及NOX4、CTGF表达异常现象(P>0.05)。体外实验:和低盐(130mMNaCl)处理组相比,高盐(170mMNaCl)处理条件下PBMC与内皮细胞的粘附数量明显增多,并且PBMC与P-selectin的结合力也明显增强(P<0.05),而敲除PSGL-1之后PBMC与内皮细胞的粘附并未随盐浓度改变而出现明显的变化(P>0.05)。与低盐组相比,高盐能够明显增加Bend.3细胞中粘附因子(E-selectin、VCAM-1、ET-1、vWF)蛋白表达量(P<0.05),而NF-κB抑制剂(PDTC)能够抑制高盐诱导的粘附分子表达的增加(P<0.05)。结论:PSGL-1参与高盐诱导的T细胞、巨噬细胞浸润,血管收缩因子ET-1、血管舒张因子eNOS/NO表达失衡和氧化应激标志蛋白NOX4、肾脏纤维化标志蛋白CTGF分泌异常;PSGL-1缺失对血管舒张功能损伤、肾脏损伤具有保护作用,进而改善高盐诱导的高血压等血管疾病,为高血压的防治提供新思路。目的:内皮细胞损伤是动脉粥样硬化发生的始动环节,内皮向间质转化(EndMT)与动脉粥样硬化的发生密切相关。本研究的主要目的在于探究肝脏特异性表达的miR-122是否参与血管内皮EndMT的发生,进而参与动脉粥样硬化的发生发展。方法:体内实验:ApoE-/-小鼠分别正常饮食和高脂饮食喂养12周后,用HE染色和油红O脂肪染色法检测主动脉根部动脉斑块形成情况和脂质沉积情况,用real-time PCR方法检测血清、动脉和肝脏中miR-122的表达情况;体外实验一:向HUVEC细胞和Bend.3中分别转染miRNA阴性对照(miR-NC)、miR-122模拟物(miR-122-mimic)和miR-122反义寡脱氧核苷酸(ASO-122)。转染6h后换液,之后继续作用48h,检测两种细胞内TGFβ1和TGFβR1的表达变化,确认miR-122在不同种属细胞中对TGFβ1和TGFβR1调控的差异性。观察细胞形态变化,采用Western Blot和real-time PCR分别检测内皮细胞标志物(CD31,VE-cadherin)和间质细胞标志物(Vimentin,α-SMA,FSP1)的相对表达量,免疫荧光检测内皮细胞标志物和间质细胞标志物的表达和共定位情况,确定单独转染miR-122 对 EndMT 的影响。体外实验二:用H2O2刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和小鼠脑微血管内皮细胞(Bend.3)诱导内皮细胞发生EndMT;同时采用转染miR-122的细胞给予H2O2刺激,分组为空白对照组(Control)、双氧水处理组(H202)和双氧水处理+miR-122过表达组(H2O2+miR-122mimic)三组。MiR-122转染6h后换液并给予双氧水刺激48 h。48 h后观察各组细胞形态,采用Western Blot和real-time PCR分别检测内皮细胞标志物(CD31,VE-cadherin)和间质细胞标志物(Vimentin,α-SMA,FSP1)的相对表达量,免疫荧光检测内皮细胞标志物和间质细胞标志物的表达和共定位情况,确定miR-122对H2O2诱导的EndMT的影响。结果:高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中,miR-122在肝脏组织中表达下调,在血清和动脉中表达上调;在双氧水诱导内皮细胞EndMT过程中,miR-122在人和小鼠内皮细胞中表达均上调,抑制内皮细胞中miR-122的作用可导致EndMT的发生,而单独转染miR-122则对EndMT的发生无明显影响,但过表达miR-122可以抑制双氧水诱导的EndMT。MiR-122对EndMT的影响与其靶向调节TGFβ1/TGFβR1的表达有关。结论:miR-122由肝脏分泌进入体循环,作用于动脉内膜及动脉组织,有可能通过TGFβ1/TGFβR1-EndMT途径抑制动脉粥样硬化的发生,为动脉粥样硬化的防治提供新思路。