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高原红细胞增多症(High Altitude Polycythemia,HAPC),藏医称“多血症”,是严重威胁高原人群健康的常见慢性疾病之一。据统计,我国青藏高原人群多血症患病率约为2.5%[1]。藏药多血康胶囊是著名藏医大师措如?才郎以藏医理论为指导,经多年临床实践、研制的治疗多血症疗效确切的经验方,主要有活血散瘀、清热解毒等功效[2]。该方由余甘子、红景天、沙棘、干姜构成。现代研究表明,多血康胶囊具有提高机体缺氧耐受力、缓解疲劳等功能[3]。目前,多血康胶囊的提取工艺及成分分析尚无文献报道。此外,随着近年来红景天需求量急增,市场上出现许多近缘品种代用的情况。本研究首先针对市场常见3种红景天(大花红景天 Rhodiola crenulata(HK. f. et Thoms.) H. Ohba、狭叶红景天Rhodiola kirilowii(Regel) Maxim、长鞭红景天Rhodiola fastigiata(Hk. f. et Thoms.) S. H. Fu)进行主要化学成分和抗氧化作用对比分析;然后优化以红景天组方的多血康胶囊的提取工艺,通过色谱联用技术对其化学组分进行识别分析,最后测定复方中5种化学成分含量,为多血康胶囊的质量控制提供参考依据1。 目的: 1.比较红景天3个常见品种抗氧化能力与有效成分的差异; 2.确定多血康胶囊的最佳提取工艺; 3.明确多血康胶囊的化学成分组成及含量。 方法: 1.采用HPLC法同时测定大花红景天、狭叶红景天、长鞭红景天中红景天苷、酪醇、没食子酸、咖啡酸和对香豆酸5种有效成分的含量,结合体外抗氧化实验,通过统计分析,比较红景天3个常见品种抗氧化能力与化学成分的差异性; 2.以得膏率、没食子酸、红景天苷的含量为指标,采用均匀设计,通过回归分析,研究多血康胶囊的最佳提取工艺; 3.采用UPLC-Q-TOF-MS及GC-MS分析技术明确多血康胶囊的化学成分组成; 4.基于HPLC同时测定多血康胶囊中红景天苷、酪醇、没食子酸、柯里拉京及鞣花酸5种化学成分含量。 结果: 1.红景天苷、酪醇、没食子酸、咖啡酸的含量高低顺序均为大花红景天>狭叶红景天>长鞭红景天,对香豆酸含量高低顺序为狭叶红景天>大花红景天>长鞭红景天;清除DPPH?和ABTS?+两种自由基能力强弱顺序均为大花红景天>狭叶红景天>长鞭红景天,清除?OH能力强弱顺序为大花红景天>长鞭红景天>狭叶红景天。 2.多血康胶囊醇最佳提取工艺:按比例称取药材饮片,加入50%的乙醇,料液比1:14,浸泡1.5 h,回流时间1 h,重复2次。 3. LC-MS及GC-MS发现,多血康胶囊醇提取物中主要含有红景天苷、没食子酸、大花红景天素、Rhodalidin、柯里拉京、鞣花酸、诃子鞣酸等成分。多血康挥发油中主要含有正辛醇、姜烯、倍半水芹烯、芳樟醇、(4Z)-4-(1,5-二甲基-4-己烯亚基)-1-甲基环己烯、姜黄烯等成分。 4.多血康胶囊中没食子酸含量范围为35.996~36.044 mg·g-1,酪醇含量范围为1.972~2.006 mg·g-1,红景天苷含量范围为2.942~3.023 mg·g-1,柯里拉京含量范围为8.009~8.085 mg·g-1,鞣花酸含量范围为8.729~8.820 mg·g-1。 结论: 1.红景天3个常见品种的化学成分与抗氧化能力存在差异性,大花红景天较狭叶红景天和长鞭红景天好; 2.多血康胶囊提取工艺合理,简单易行; 3.在明确多血康胶囊化学组成的基础上,建立其5种化学成分含量同时测定方法,为多血康胶囊的药效物质基础及质量控制研究提供参考依据。