冬凌草甲素经线粒体通路诱导人食管癌细胞凋亡的研究

来源 :汕头大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zhaohui1590
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目的:研究冬凌草甲素(oridonin,ORI)体外抗肿瘤作用及ORI诱导人食管癌细胞凋亡的作用机制。方法:用不同浓度ORI分别作用人食管癌SHEEC细胞株不同时间,噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞生长抑制率;透射电镜观察细胞凋亡尤其是线粒体的超微结构改变;原位末端标记/碘化吡啶(TUNEL/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期;罗丹明123(Rho123)染色流式细胞术检测线粒体膜电位(△Ψm);Western blot检测相关蛋白的表达变化;RT-PCR检测相关基因的表达变化。结果:在体外抗肿瘤作用方面,ORI对SHEEC细胞的生长有显著的抑制效应,64μg/ml的ORI作用24h、48h及72h对SHEEC细胞生长的抑制率分别为78.7%、89.5%及91.7%;8、16、32μg/ml的ORI作用24h后,透射电镜下均观察到多数细胞核呈明显的染色质凝块边集的凋亡现象;流式细胞仪检测凋亡率分别为9.3%、21.1%和47.7%,同步细胞周期图像显示凋亡峰趋于明显,同时有S期的逐渐抬高。在诱导细胞凋亡的机制方面,32μg/ml的ORI作用2h后,电镜下可见线粒体在细胞核出现变化之前已发生形状改变,作用8h后,线粒体内部结构消失,细胞核呈细胞凋亡的典型改变;8、16、32μg/ml的ORI作用24h,Rho(-)细胞比例分别是3.2%、9.8%和45.7%,同时检测到蛋白细胞色素C(CytC)、Caspase-9表达呈浓度依赖性上调;32μg/ml的ORI作用1h和8h,随着作用时间延长,与凋亡调控相关的基因的表达发生了明显的变化,部分逐渐升高,而部分表达则逐渐降低。结论:ORI有可能为细胞周期特异性药物,在体外能显著地抑制人食管癌细胞生长;ORI能有效地诱导人食管癌细胞凋亡,其作用机制与启动线粒体凋亡通路相关。
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