刺玫果活性成分的提取及抗炎、免疫活性的研究

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刺玫果是广泛分布于我国东北地区的中药保健食品山刺玫(Rosa davurica Pall.)的成熟果实,中国民间主要使用刺玫果制作药酒、煎剂、茶水等来治疗消化不良、胃痛、气滞腹泻、月经不调等病症。经研究证实,刺玫果的主要成分包括黄酮、皂苷、多糖等,同时潜藏抗氧化、护肝、肿瘤、降脂、抗炎免疫免疫等生理活性。本文借助天然产物分离提取技术,对刺玫果活性物质进行了分离提取工作,应用现代活性物质研究方法,对刺玫果主要成分进行药理活性的评估,并对刺玫果抗炎和免疫增强活性的作用机制进行了探究,主要内容如下:对刺玫果进行回流提取和分级萃取得到刺玫果氯仿提取物(CHL)、刺玫果乙酸乙酯提取物(EA)、刺玫果正丁醇提取物(n-Bu)和刺玫果水相提取物,进一步对EA、n-Bu和水提取物通过不同方法分离得到不同浓度梯度乙醇洗脱的黄酮(30%Fla、50%Fla、70%Fla、90%Fla)皂苷(30%Sap、50%Sap、70%Sap、95%Sap)以及粗多糖样品,含量测定及抗氧化试验结果显示30%Fla、50%Fla和30%Sap、50%Sap样品黄酮和皂苷含量较高,且抗氧化活性较为良好。在CCl4和H2O2损伤的LO2细胞肝损伤试验中,刺玫果黄酮和皂苷样品表现出了相对良好的护肝潜力;采用HepG2、A549、mda-mb-231和MCF-7四种癌细胞株对刺玫果活性物质的抗肿瘤活性进行评定,结果表明刺玫果EA和n-Bu部位的抗癌活性较为良好;以3T3-L1前脂肪细胞为模型评估刺玫果大类物质的对3T3-L1细胞脂质积累的影响,结果显示刺玫果皂苷和黄酮样品对于3T3-L1细胞脂质代谢显示出了调节功能,其中30%Sap的抑制作用最突出;刺玫果粗多糖在细胞吞噬中性红试验中表现出了最良好的免疫增强活性;以脂多糖为诱导剂,建立细胞炎症模型,通过测定样品对NO释放量的影响,筛选出黄酮,皂苷为刺玫果主要抗炎活性成分;采用ELISA,RT-qPCR和Western Blot方法测定结果表明刺玫果黄酮,皂苷可以显著抑制IL-6和TNF-α的分泌,调控MAPKs/NF-κB信号通路相关mRNA和蛋白的表达,从而调控细胞炎症反应,发挥抗炎活性。LC-MS/MS结果显示刺玫果50%Fla含有山奈酚-3-O-芸香糖苷、熊果酸,刺玫果30%Sap含有金丝桃苷、木犀草素、熊果酸、蔷薇酸等成分。将刺玫果粗多糖经DEAE层析柱分离后获得了6种纯化多糖P-Ⅰ、P-Ⅱ、P-Ⅲ、P-Ⅳ、P-Ⅴ、P-Ⅵ,经GPC分析,P-Ⅰ、P-Ⅱ、P-Ⅴ可被认定为组份相对单一的均一性多糖。利用分光光度法对多糖样品进行了理化性质分析和红外检测。巨噬细胞NO释放实验结果显示,P-Ⅰ、P-Ⅱ、P-Ⅳ、P-Ⅴ、P-Ⅵ具有良好的免疫增强活性;借助RT-PCR发现刺玫果纯化多糖可以通过上调IL-1β、IL-6、iNOS、TNF-αmRNA的表达,激活巨噬细胞的免疫功能。最后,通过Western Blot方法对免疫调控中关键细胞因子蛋白表达情况,对ERK、JNK、P38蛋白磷酸化水平进行评价,结果表明刺玫果纯化多糖可以通过调控炎症因子蛋白的表达,调节MAPKs通路蛋白的磷酸化水平发挥免疫调节作用。
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