NK/T细胞淋巴瘤多药耐药细胞系中侧群细胞生物学特性研究

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背景与目的淋巴瘤是一类起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤,主要侵犯淋巴结或结外淋巴器官。根据病理学、遗传学、免疫学和临床特点的不同,分为霍奇金淋巴瘤(Hodgkins lymphoma,HL)与非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma,NHL)。NK/T细胞淋巴瘤(NK/T cell lymphoma,NKTCL)约占NHL的10%,在亚洲人群中发病率较高,在我国更为多见,占全部淋巴瘤的21.38%。主要侵犯鼻腔、鼻咽、鼻窦、皮肤、睾丸、骨髓等器官,部分病患伴发B症状,例如消瘦、盗汗、发热等。该疾病恶性程度高,病程凶险,临床进展快,易复发与耐药,预后极差。因此,在近年的肿瘤相关研究中,多药耐药的研究成为淋巴瘤治疗一个热点。侧群(Side population,SP)细胞是由Goodell在分离骨髓干细胞时,发现居于多数细胞一侧的少量细胞具有多向分化、无限增殖及自我更新等生物学特性。肿瘤细胞中的SP细胞不仅具有上述生物学特性,而且比非SP细胞具有更强的成瘤能力、侵袭能力及耐药性。NKTCL临床治疗效果差与细胞表达多药耐药(multidrug resistance,MDR)基因密切相关,这些基因导致肿瘤细胞对化疗药物敏感性下降,造成肿瘤的耐药与复发。MDR基因多为ATP结合盒式蛋白(ATP-binding cassette,ABC)转运体家族成员,它们以ATP依赖的、主动运输的方式将细胞内的底物转运出细胞,限制细胞内底物浓度,与肿瘤细胞多药耐药性相关。因此,本研究拟通过分选NK/T细胞淋巴瘤耐药株中的SP细胞,并研究其生物学特性以及ABCG2蛋白和RNA的表达情况,探索NKTCL多药耐药的相关机制。方法构建NK/T细胞淋巴瘤细胞系SNK-6耐阿霉素细胞株SNK-6/ADM,并检测其多药耐药性。分选SNK-6/ADM细胞株中的侧群细胞SNK-6/ADM-SP,并通过CCK8法、流式细胞术检测SNK-6/ADM-SP的增殖、细胞周期、细胞表面分子标志物和多药耐药等生物学特性。并通过Real Time-PCR、Western Blot技术测定SNK-6/ADM-SP细胞中的ABC相关基因及蛋白的表达情况。结果1、SNK-6/ADM的耐药指数(Resistance Index,RI)=5.158。SNK-6和SNK-6/ADM对吉西他滨、阿霉素、顺铂、培门冬酶的半数抑制率(Inhibition of concentration 50%,IC50)分别为0.076±0.016、0.067±0.00,57.268±0.225、37.49±0.639,5.19±0.541、23.63±1.157,4.569±0.652、5.338±0.403。2、SNK-6/ADM-SP细胞株对吉西他滨、阿霉素、顺铂、培门冬酶的IC50值分别为0.089±0.014、63.55±1.847、61.09±1.502、5.534±0.207。SNK-6/ADM-SP增殖和凋亡速度较慢(p<0.05);G0/G1比例为(63.3±2.4)%,G2/M比例为(6.377±0.578)%,S期比例为(30.333±1.856)%;表达CD56+,CD16-,CD34-和CD117-的细胞群体比例与SNK-6、SNK-6/ADM相似。4、SNK-6/ADM-SP细胞系较SNK-6、SNK-6/ADM细胞系高表达ABCG2mRNA和蛋白(p<0.05)。结论1、NK/T细胞淋巴瘤多药耐药细胞系侧群细胞是一类成熟NK/T细胞、多药耐药性更强。2、NK/T细胞淋巴瘤的多药耐药性与高表达ABCG2基因和蛋白高表达相关。
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