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本研究通过系列实验,用GHRP-2处理猪垂体腺细胞和生长猪,揭示GHRP-2促进垂体腺细胞分泌GH的作用特点、GHRP-2同GHRH、SS对垂体腺细胞作用的关系;探索GHRP-2促GH分泌可能的信号途径,以揭示GHRP-2促生长的规律及可能机制;研究GHRP-2对猪生产性能、氮代谢、血液中GH浓度的影响,以探索GHRP-2对猪生产的应用前景,为GHRPs在生产实践中的开发和利用提供理论依据。实验一:GHRP-2对猪腺垂体细胞分泌GH规律的影响研究。共进行三个实验,分离1~3日龄新生仔猪腺垂体细胞,贴壁培养形成单层后,①分别用0、10-12、10-11、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5Mol浓度的GHRP-2处理垂体细胞2h;②用10-6Mol浓度的GHRP-2处理垂体细胞5min至180min;③用10-6Mol GHRP-2连续依次处理垂体细胞6次,每次1h。处理结束后,收集培养基,测定GH浓度。结果表明:①10-12~10-5Mol浓度的GHRP-2都能作用于体外培养的垂体细胞,刺激垂体细胞分泌GH(P<0.01),10-12~10-8Mol浓度之间差异不显著(P>0.05),10-7~10-5组极显著高于10-12~10-8Mol(P<0.01),GHRP-2适宜浓度为10-6Mol;②GHRP-2能引起GH的快速分泌,在5min就可使GH的分泌达到最大,并与以后时间的处理效应无差异;③在连续处理的前三次,GHRP-2能促进GH的分泌,从第四次开始,GH的分泌出现抑制状态,并随着处理次数的增加抑制状态更强。结论:GHRP-2能够促进垂体细胞分泌GH,其作用效果与处理剂量、时间和次数有关。实验二:GHRP-2对猪腺垂体细胞分泌GH机理的研究。共进行三个实验。分离1~3日龄新生仔猪腺垂体细胞,在培养成单层垂体细胞的培养板中,①分别用GHRP-2、GHRH、SS、GHRP-2+GHRH、SS+GHRP-2、GHRH+SS处理垂体细胞2h;②GHRP-2、GHRH、PMA、PMA+GHRP-2、GHRP-2+GHRH处理垂体细胞2h;③将垂体细胞同10-6M PMA温育24h耗竭胞内的PKC前、后,用GHRP-2、GHRH、GHRP-2+GHRH处理垂体细胞2h。处理结束后,收集培养基,测定GH浓度。结果表明:①GHRP-2和GHRH单独或联合处理猪垂体细胞能显著增加GH的分泌(P<0.01),SS能完全抑制GHRH的促GH分泌的效应(P<0.01),SS不影响GHRP-2的促GH分泌的效应,GHRP-2+GHRH具有协同促GH分泌的作用;②GHRP-2、GHRH、PMA都能刺激腺垂体细胞分泌GH,其中以GHRP-2的作用最强,GHRH、PMA次之;而GHRP和GHRH与PMA联合作用都能极显著地促进GH的分泌(P<0.01);③GHRH促GH分泌的效应不受PMA预处理的影响,而GHRP-2促GH分泌的效应却因PMA的预处理使PKC的耗竭而与对照组相比显著降低(P<0.01),GHRP-2和GHRH的联合处理效应与PMA处理前相比也显著降低(P<0.01),但预处理组GHRP-2+GHRH仍有协同效应存在。结论:GHRP-2作用于猪的垂体细胞促GH的机制与GHRH不同,GHRP与胞内PKC信号转导途径相关。实验三:GHRP-2对生长猪GH分泌模式的影响研究。选择25kg体重的去势公猪,通过外科手术安装颈静脉插管,将8只猪随机地分为两组,每组4只,一组为对照,一组为处理组,处理组肌肉注射30μgGHRP-2/kgBW,于注射后的0、15、30、45、60、90、120、180min以及6h、9h、12h通过插管采取5ml血样,分离血清,用放免法测定GH含量。结果表明:处理组在30~90min期间血中GH的含量极显著高于对照组(p<0.01),并在60min达到分泌高峰,120min后回落到对照组水平。结论:肌肉注射30μg GHRP-2/kgBW能够提高外周血液中的GH浓度,并在30~90min分泌量极显著大于对照组,60min达到峰值。实验四:GHRP-2对生长猪生产性能和氮代谢的影响。选择体重(33±2)kg的DLY猪20头,随机分成4组,每组5头,分别以0、3、9、27μg/kgBW的剂量每日肌肉注射GHRP-2,试验期28d。在试验的第三周进行4d的代谢试验:在第四周末测量活体背膘和眼肌厚度。结果表明:在处理的第一、二周末日增重随着处理剂量的增加而增加,27μg/kgBW组的日增重和饲料转化效率显著高于对照组;连续处理的第三周出现生长抑制现象,第四周又能恢复到对照水平,实验期的采食量处理与对照组间无明显差异。饲料氮在第三周的消化率各组分别为82.92%、81.29%、82.3%、85.15%;代谢率52.59%、51.8%、53.20%、56.67%。GHRP-2处理组有减少背膘和增加眼肌厚度的趋势。结论:生长猪肌肉注射GHRP-2 27μg/kgBW在两周范围内达到提高日增重和降低料重比的作用,第三周出现生长抑制现象;GHRP-2对生长猪生产性能的影响依赖于GHRP-2处理的剂量,时间和频率。体内外试验表明,GHRP-2能促进猪垂体细胞GH的释放,作用效果与处理剂量和频率有关,作用的信号途径与GHRH不同、而与PKC有关。生长猪肌肉注射27μgGHRP-2/kgBW在两周内有明显促进生长、改善饲料利用率的作用。连续多次使用GHRP-2可抑制GH分泌和动物生长,其机制有待进一步研究。