信号转导分子PAK4相互作用蛋白质的筛选 前言 肿瘤是世界范围内人类疾病,其发病率持续上升,严重威胁着人们的身心健康。因此,对于肿瘤的发病机制及诊断治疗研究成为我国目前对肿瘤研究的一个重要课题。寻找肿瘤治疗靶点是当前该领域研究的热点。其中对细胞信号转导通路关键蛋白作用分子机制的深入了解能使我们认识恶性肿瘤发生发展的规律所在,在关键作用靶点进行阻遏,达到治疗肿瘤的目的,是近年来人们探寻肿瘤治疗的方向。 P21活化激酶(P21-activated kinase,PAK)是一类进化上保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,为Rho家族小鸟苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42/Rac下游主要靶蛋白,参与许多重要细胞活动。到目前为止PAK家族共有6个成员,皆含有氨基末端(N-末端)调节区和羧基末端(C-末端)激酶区。根据其结构相似性,将它们分为两类,Ⅰ类包括PAK1,PAK2和PAK3,Ⅱ类包括PAK4,PAK5和PAK6。两类PAK在结构、活化方式、生物学功能上有很大的区别,它们具有不同的下游靶蛋白。通过对PAK1下游靶蛋白的研究,我们了解其在肿瘤发生发展中的重要作用。同时,很多学者相继报道了一些与PAK4相互作用的靶蛋白,表明其在肿瘤进展中存在着与Ⅰ类PAK不同的作用方式。本课题主要是利用酵母双杂交的方法,从人胎脑cDNA文库中筛选PAK4相互作用蛋白,进一步了解其生物学特性和功能。 实验材料与方法 一、实验材料 基因克隆相关分子生物学试剂 酵母双杂交和酵母蛋白、质粒提取相关试剂 二、实验方法