白花蛇舌草多糖提取工艺及免疫调节作用研究

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本研究以中医药理论为指导,采用现代研究手段和生产工艺,对清热解毒的传统中药白花蛇舌草的活性成分一多糖(Polysaccharides From Hedyotis diffsua Willd,PHDW)进行提取、精制,采用响应面分析(RSA)优化酶法考察提取温度、pH及酶用量等3个因素对白花蛇舌草多糖提取率的影响,经过去除杂质和色素,以苯酚硫酸法对提取的白花蛇舌草多糖进行测定,得出响应面分析优化确定白花蛇舌草多糖的最佳提取工艺条件为:pH7.8、提取温度55.7℃、酶用量为2.5%,在此条件下PHDW提取率为9.83%。采用酶法RSA分析法优化PHDW的提取方法,得到的工艺条件参数准确可靠,提取的多糖纯度高,条件易于控制,可以用于大规模生产,具有实用价值。取健康昆明小鼠80只,随机分为正常对照组(CN,灌胃生理盐水)、免疫抑制模型组(M,灌胃生理盐水)和白花蛇舌草多糖低、中、高剂量组(PHDW-L, PHDW-M, PHDW-H,分别灌胃白花蛇舌草多糖50、100、200mg/kg bw)5组。除CN组外,其他各组腹腔注射环磷酰胺(CTX, 100mg/kg bw)3d,建立免疫抑制小鼠模型;各组分别用生理盐水和白花蛇舌草多糖灌胃1次/d,连续15d后,测定免疫器官指数、血清溶血素、脾淋巴细胞增殖、脾脏NK细胞活性和小鼠血清细胞因子11-2、11-6、TNF-a含量等免疫指标。结果显示,与CN组比较,M组脾脏指数、胸腺指数、血清溶血素、脾淋巴细胞增殖能力、脾脏NK细胞和血清Il-2、 Il-6、TNF-a水平等均显著降低(p<0.05或p<0.01);与M组比较,PHDW-M和PHDW-H组能显著的提高小鼠的免疫器官指数(p<0.05)和血清溶血素(P< 0.01), PHDW各组对ConA诱导的脾淋巴细胞转化有显著的促进作用(p<0.05),PHDW-M与PHDW-H组对LPS诱导的脾淋巴细胞转化和NK细胞活性功能具有显著的促进作用(p<0.01)。PHDW各组能显著提高免疫抑制小鼠血清中的II-2、Il-6、TNF-a水平(p<0.01)。以上结果表明:白花蛇舌草多糖能提高免疫抑制小鼠的免疫功能。采用MTT法观察白花蛇舌草多糖的体外免疫增强作用。MTT法结果显示:白花蛇舌草多糖对小鼠脾脏淋巴细胞代谢、协同ConA与LPS诱导转化有明显的促进作用(p<0.05或p<0.01),200μg/mL的白花蛇舌草多糖促进作用最为显著(p<0.01);同时白花蛇舌草多糖对体外培养的小鼠脾脏巨噬细胞代谢和吞噬作用有显著的促进作用(p<0.01),但对体外培养的小鼠胸腺淋巴细胞代谢、协同ConA与LPS诱导转化没有明显的影响(p>0.05);白花蛇舌草多糖对小鼠胸腺的巨噬细胞代谢、吞噬功能无显著促进作用(p>0.05);但对小鼠胸腺细胞和脾NK细胞活性有显著增强作用(p<0.01),并呈现出明显的量效双向作用关系,在浓度为150μg/mL时促进作用最明显。体外免疫试验结果表明:白花蛇舌草多糖对小鼠脾脏淋巴细胞代谢、协同ConA与LPS诱导转化、对小鼠巨噬细胞代谢和吞噬功能、对小鼠脾脏和胸腺NK细胞杀伤活性等均有明显的促进作用,说明白花蛇舌草多糖可以增强胸腺和脾脏的体外免疫功能。
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