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第一部分：PI3K-Akt信号通路在肝母细胞瘤的作用研究背景肝母细胞瘤(hepatoblastoma, HB)是儿童最常见的肝脏恶性肿瘤。近20年来由于肝肿瘤切除手术和化疗的优化结合,术前术后化疗方案的个体化措施的发展,肝母细胞瘤患儿的预后有了很大的改善。PI3K-Akt通路是一个经典的抗凋亡、促存活的信号转导途径,在肿瘤发生、增殖、侵袭、转移中发挥重要作用。研究目的本研究通过分析PI3K, AKT在肝母细胞瘤细胞系及其肿瘤和癌旁组织的表达情况,了解PI3K-Akt通路在肝母细胞瘤中的重要意义,为后续开发通过抑制该通路治疗肝母细胞瘤的靶向药物提供理论依据。研究方法我们通过差异基因表达筛查发现PI3K-Akt通路的相关因子包括PI3K,Akt,PKC,PKB及GSK-3等在肿瘤组织中特异性的高表达。利用MTT法测定LY294002作用前后肝母细胞瘤细胞系HuH-6和HepG2的增殖；通过Western blot分析PI3K通路抑制剂LY294002对肝母细胞瘤细胞系中PI3K、Akt表达的影响；RT-PCR检测PI3KmRNA在肿瘤和癌旁组织的表达差异；Western blot检测PI3K、p-Akt(Ser473)以及总的Akt蛋白在肿瘤和癌旁组织的差异。结果本研究中,我们发现HuH-6和HepG2细胞对不同浓度的PI3K抑制剂LY294002处理具有剂量依懒性增殖抑制；同时,随着PI3K通路抑制剂LY294002浓度的增加,PI3K、p-Akt(Ser473)蛋白在HuH-6和HepG2细胞中的表达逐渐下降,且各组之间的差异存在统计学差异(p<0.001)；PI3K mRNA在肿瘤组织中的表达显著高于癌旁组织；PI3K和p-Akt(Ser473)蛋白在肿瘤组织的表达显著高于癌旁组织。而总的Akt和β-actin在两组病人中无显著差别。结论PI3K-Akt通路的激活可致使肝母细胞瘤肿瘤细胞增殖,相关基因在肿瘤组织的表达显著高于癌旁组织,提示PI3K-Akt通路在肝母细胞瘤的发生发展中起到了重要的作用。第二部分 肝母细胞瘤预后危险因素的评估研究背景肝母细胞瘤(hepatoblastoma, HB)是儿童最常见的肝脏恶性肿瘤,化疗敏感的患儿术后具有较高的总体生存率(3年生存率在75%以上)。尽管如此,肝母细胞瘤患儿的预后仍存在较大差异,因为多个危险因素与其预后密切相关。研究目的本研究的目的是确定与亚洲人群肝母细胞瘤患儿预后相关的危险因素,并分析影响患儿无事件生存(Event-Free Survival, EFS)的各个危险因素之间的相互关系。研究方法回顾性分析首都儿科研究所附属儿童医院2001年1月至2014年9月行肝肿瘤切除术的肝母细胞瘤患儿共176例,采用Kaplan-Meier生存曲线分析和Cox比例风险模型评估与肝母细胞瘤相关的危险因素。结果所有患儿(176例)的中位无事件生存时间为80.4个月(95% CI：71.6-89.2)及5年无事件生存率(EFS)54.6%,五年总体生存率(OS)66.7%。肝母细胞瘤患儿预后与AFP水平、肿瘤单发多发、PRETEXT分期、有无转移、病理分型有关。多因素分析结果显示：AFP水平(HR：2.567,P=0.014),肿瘤是否多发(HR：2.187,P=0.028),肿瘤是否转移(HR：1.912,P=0.028)以及PRETEXT IV期(HR：2.254,P=0.005)均是影响肝母细胞瘤患儿EFS的独立为危险因素。不同的病理分型分组相互影响,分别引入多因素Cox模型中进行分析提示,完全胎儿型(HR：2.752,P=0.021)是影响肝母细胞瘤患儿EFS的独立为危险因素。结论肝母细胞瘤患儿预后与AFP水平、肿瘤单发多发、PRETEXT分期、有无转移、病理分型有关。肿瘤的病理分型与其他各因素之间存在着相互作用,不同危险因素的存在进一步影响病理分型对于预后的预测。