论文部分内容阅读
背景与目的：肺癌是世界上死亡率极高的恶性肿瘤之一，而非小细胞肺癌占据肺癌的85%。高达86%的非小细胞肺癌死亡率是由于缺乏早期诊断方法，因此，深入理解非小细胞肺癌（NSCLC）的发生发展过程和分子变异机制非常重要。活化转录因子3（Activating transcription factor3,ATF3）是ATF/CREB家族的一员，已被证实在几种癌症发病过程起着很大作用。然而，ATF3在非小细胞肺癌中表达是否异常以及其甲基化状态和基因突变情况尚未明确。本研究以正常支气管上皮细胞（HBEpiC）为对照，检测分析4株非小细胞肺癌细胞株中ATF3基因在蛋白水平表达情况；并检测ATF3基因启动子区甲基化状态及其启动子区和编码区基因突变情况。方法：β-Actin作为内参, western blot检测ATF3基因在非小细胞肺癌细胞株（A549,NCI-H292,95C,95D）以及HBEpiC中的表达情况，Quantity1.0软件对ATF3蛋白表达作相对定量分析。亚硫酸氢钠处理后测序法（BSP）检测5株细胞以及20例NSCLC癌组织和癌旁组织中ATF3基因启动子区甲基化状态。DNA直接测序法分析ATF3启动子区1500bp的突变情况，同时使用单链构象多态性分析（single strand conformation polymorphism, SSCP）检测ATF3编码区突变情况。结果：与相比HBEpiC,ATF3在NSCLC细胞株中蛋白表达量显著增高(P<0.01)。Methyl Primer软件分析显示ATF3基因启动子区-1175到-1039以及-496到-288处共有27个CpG位点；且均位于转录因子结合位点之上。检测结果显示5株细胞株中27个CpG位点均未见甲基化，测序显示启动子区1500bp无遗传突变，且20例非小细胞肺癌组织中检测结果均支持细胞株检测结果。60例非小细胞肺癌组织ATF3编码区也未见遗传突变。结论：研究显示ATF3蛋白表达在NSCLC细胞株(A549,NCI-H292,95C,95D)中比正常支气管上皮细胞显著增高，显示该基因表达上调可能导致非小细胞肺癌发生。遗传以及表观遗传分析显示ATF3基因启动子区甲基化异常或者基因突变不是ATF3蛋白表达增高的主要原因。另外，ATF3基因编码区基因突变和非小细胞肺癌发生发展没有关系。