【摘 要】
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盐胁迫是植物面临的主要非生物胁迫之一,严重影响着农作物的生长和生产。甜菜M14品系是实验室前期获得具有优良性状的抗盐种质,是植物抗盐机制研究的优良材料。气孔严格调控着生物体与外界环境之间的气体、水分和信息的交换,在植物响应非生物胁迫和生物胁迫中均发挥着重要作用。为了更好的探究甜菜M14品系的抗盐分子机制,本试验利用i TRAQ技术对盐胁迫前后叶片保卫细胞差异表达蛋白质进行了研究。本试验首先对甜菜M
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盐胁迫是植物面临的主要非生物胁迫之一,严重影响着农作物的生长和生产。甜菜M14品系是实验室前期获得具有优良性状的抗盐种质,是植物抗盐机制研究的优良材料。气孔严格调控着生物体与外界环境之间的气体、水分和信息的交换,在植物响应非生物胁迫和生物胁迫中均发挥着重要作用。为了更好的探究甜菜M14品系的抗盐分子机制,本试验利用i TRAQ技术对盐胁迫前后叶片保卫细胞差异表达蛋白质进行了研究。本试验首先对甜菜M14品系叶片气孔开度测量方法和保卫细胞富集方法进行了优化。优化后气孔开度测量方法为:撕取甜菜叶片表皮用卡诺氏固定液固定45 sec,通过共聚焦显微镜成像,再通过image J软件测量气孔开度。优化后保卫细胞富集方法为:通过搅拌法获取叶片表皮后,使用4.2%纤维素酶R10、0.15%离析酶R10和0.2%果胶酶Y23酶解20 min,利用叶肉细胞特异性表达基因ATPase-1的实时荧光定量PCR结果对富集后保卫细胞纯度进行鉴定。对200 mM和400 mM NaCl胁迫下的甜菜M14品系叶片60 min内各个时间点的气孔开度和保卫细胞APX酶活进行测定,确定保卫细胞响应盐胁迫的最佳时间点。结果表明:200 mM和400 mM Na Cl胁迫下保卫细胞响应盐胁迫的最佳时间分别是盐胁迫后10 min和20 min。利用iTRAQ标记技术对不同浓度(0、200、400 mM)Na Cl胁迫下甜菜M14品系叶片保卫细胞蛋白质进行标记,通过LC-MS/MS技术进行定量蛋白质组学分析。最终在200 mM Na Cl胁迫下鉴定出差异表达蛋白质90个,其中46个上调、44个下调,在400 mM Na Cl胁迫下鉴定出差异表达蛋白质75个,其中19个上调、56个下调;在200 mM和400 mM Na Cl胁迫下共有6个差异表达蛋白质。200 mM和400 mM Na Cl胁迫下保卫细胞差异表达蛋白质的功能分类表明,这些蛋白质参与了代谢、运输、生物合成、细胞结构、能量、信号转导、转录、抗逆及防御、光合作用等方面。进一步通过Real-Time PCR实验对200 mM和400 mM Na Cl胁迫下重要的差异表达蛋白质编码基因进行了转录水平验证。初步提出甜菜M14品系保卫细胞蛋白质应答盐胁迫的分子模型,对进一步完善甜菜M14品系抗盐分子模型具有重要意义。
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高中思想政治学科核心素养之一的科学精神,需要在课后作业中加以落实。以发展精神素养为目标的思想政治课后作业,可以引入新结构教学评框架。新结构教学评框架是以学科核心素养为导向的教学评管理工具和操作范式。思想政治课后作业借鉴新结构教学评框架,可以设计新结构教学评课后作业,系统优化作业要素,构建课后作业框架。以科学精神为导向,分设作业目标,优化作业设计,提升作业反思,最终达成发展科学精神素养的目标。
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