盐胁迫下甜菜M14品系保卫细胞蛋白质组学研究

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盐胁迫是植物面临的主要非生物胁迫之一,严重影响着农作物的生长和生产。甜菜M14品系是实验室前期获得具有优良性状的抗盐种质,是植物抗盐机制研究的优良材料。气孔严格调控着生物体与外界环境之间的气体、水分和信息的交换,在植物响应非生物胁迫和生物胁迫中均发挥着重要作用。为了更好的探究甜菜M14品系的抗盐分子机制,本试验利用i TRAQ技术对盐胁迫前后叶片保卫细胞差异表达蛋白质进行了研究。本试验首先对甜菜M14品系叶片气孔开度测量方法和保卫细胞富集方法进行了优化。优化后气孔开度测量方法为:撕取甜菜叶片表皮用卡诺氏固定液固定45 sec,通过共聚焦显微镜成像,再通过image J软件测量气孔开度。优化后保卫细胞富集方法为:通过搅拌法获取叶片表皮后,使用4.2%纤维素酶R10、0.15%离析酶R10和0.2%果胶酶Y23酶解20 min,利用叶肉细胞特异性表达基因ATPase-1的实时荧光定量PCR结果对富集后保卫细胞纯度进行鉴定。对200 mM和400 mM NaCl胁迫下的甜菜M14品系叶片60 min内各个时间点的气孔开度和保卫细胞APX酶活进行测定,确定保卫细胞响应盐胁迫的最佳时间点。结果表明:200 mM和400 mM Na Cl胁迫下保卫细胞响应盐胁迫的最佳时间分别是盐胁迫后10 min和20 min。利用iTRAQ标记技术对不同浓度(0、200、400 mM)Na Cl胁迫下甜菜M14品系叶片保卫细胞蛋白质进行标记,通过LC-MS/MS技术进行定量蛋白质组学分析。最终在200 mM Na Cl胁迫下鉴定出差异表达蛋白质90个,其中46个上调、44个下调,在400 mM Na Cl胁迫下鉴定出差异表达蛋白质75个,其中19个上调、56个下调;在200 mM和400 mM Na Cl胁迫下共有6个差异表达蛋白质。200 mM和400 mM Na Cl胁迫下保卫细胞差异表达蛋白质的功能分类表明,这些蛋白质参与了代谢、运输、生物合成、细胞结构、能量、信号转导、转录、抗逆及防御、光合作用等方面。进一步通过Real-Time PCR实验对200 mM和400 mM Na Cl胁迫下重要的差异表达蛋白质编码基因进行了转录水平验证。初步提出甜菜M14品系保卫细胞蛋白质应答盐胁迫的分子模型,对进一步完善甜菜M14品系抗盐分子模型具有重要意义。
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