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3-氯-1,2-丙二醇(3-MCPD)脂肪酸酯,即3-MCPD与长链脂肪酸形成的酯类,主要产生于油脂精炼等食品加工过程中。近年来,有关3-MCPD酯的安全性问题引起了业界及政府的广泛关注。目前,关于3-MCPD酯的毒理学研究主要集中在肾脏和睾丸,其毒理和暴露评估数据仍然不足,尤其是对免疫系统的影响鲜有报道。本课题选取3种3-MCPD棕榈酸酯(1-棕榈酸单酯(1-pal)、2-棕榈酸单酯(2-pal)及1,2-二棕榈酸二酯(dipal))作为探针化合物,研究3-MCPD酯在体内体外对小鼠T淋巴细胞的免疫抑制作用及相关机制。首先,采用MTT的方法检测3-MCPD棕榈酸酯对T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖的抑制作用。结果表明,1-pal及2-pal对刀豆蛋白A(ConA)诱导的T淋巴细胞的增殖具有明显抑制作用,dipal无明显作用;只有2-pal对脂多糖(LPS)诱导的B淋巴细胞的增殖出现明显抑制作用,因此后续实验中采用T淋巴细胞为主要研究对象。采用流式细胞术检测3-MCPD棕榈酸酯对T淋巴细胞周期的影响,结果表明,1-pal、2-pal抑制细胞进入S期及G2/M期,由此抑制细胞的增殖。采用Western blot检测3-MCPD棕榈酸酯对ConA诱导的T细胞中MAPK信号通路的影响,发现1-pal对JNK、p38通路均存在抑制作用,2-pal无显著作用。其次,采用流式细胞术检测3-MCPD棕榈酸酯对T细胞分化的影响。结果显示,3-MCPD棕榈酸单酯显著降低CD4~+T细胞亚群数量及CD4~+/CD8~+T细胞的比值。通过采用ELISA试剂盒检测发现,棕榈酸单酯能显著抑制Th1及Th2型细胞因子的表达。采用Western blot及免疫荧光检测进一步分析3-MCPD棕榈酸酯对ConA诱导的T细胞NF-κB信号通路的影响,发现1-pal及2-pal对NF-κB通路均存在显著抑制作用。在体内试验中,通过2,4-二硝基氟苯(DNFB)诱导建立迟发型超敏反应(DTH)模型,以1-pal为代表,进一步验证3-MCPD酯对T细胞的免疫抑制作用。采用游标卡尺测量左右耳厚度,计算厚度差;眼眶采血,采用ELISA试剂盒检测细胞因子IFN-γ的表达;取激发侧耳片制成石蜡切片,染色后观察局部组织病理学变化。结果表明,1-pal能显著抑制DTH模型小鼠的耳肿胀反应及血清中细胞因子的表达,说明1-pal具有体内抑制T细胞免疫活性的作用。综上所述,体内体外实验结果均表明3-MCPD棕榈酸单酯对小鼠T细胞具有一定的免疫抑制作用,并通过MAPK及NF-κB通路介导,且棕榈酸不同取代位置及取代数目影响3-MCPD棕榈酸酯的免疫抑制作用。本研究为3-MCPD酯安全性评价提供一定理论依据。