利用原生质体技术选育聚β羟基丁酸高产菌株和发酵条件的研究

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PHB在自然界中是作为微生物自身能量的储存物质而存在于细胞内,除具有与化学合成塑料聚丙烯相似性外,还具有生物相容性和生物可降解性.在"白色污染"日益严重的今天,PHB作为生物降解塑料的原料倍受瞩目,成为国内外研究的热点.但是,目前发酵生产成本高,价格是普通塑料的许多倍,不利于工业化生产.解决上述问题的主要途径包括:(1)开发优良的菌种,使其高产PHB;(2)利用价廉的原料,以降低原料成本;(3)优化PHB的合成过程,以便于操作和降低原料消耗;(4)开发合适的提取工艺,是提取成本降到最低限度.其中,高产菌种的选育是其研究的关键部分.目的:选育PHB高产菌株,提高PHB产量.方法:实验选取两株在形态上和生理特性上差别较大的产PHB菌株作为出发菌株,进行原生质体融合和激光诱变,在此基础上对其摇瓶发酵条件进行优化.结果:用溶菌酶水解细胞壁,其原生质体形成率S-8为78.0%,Q-72为96.0%;再生率S-8为19.5%,Q-72为31.4%.然后,用促融剂聚乙二醇(PEG)使两亲本菌株进行融合,获得融合子8株.融合子R-7的PHB产量明显提高,遗传性稳定.同时经激光诱变得到正突变菌株6株,其中突变菌株Y-17在发酵过程中能够积累4.86g/L的PHB,比出发菌株S-8相比,其PHB的提高率为67.0%.在最适条件下,Y-17菌株能够积累PHB达5.82g/L.采用补料发酵实验,定时流加碳源、氮源和H<,2>O<,2>,明显提高了PHB含量,即PHB达到10.93 g/L.结论:突变菌株Y-17产PHB能力强,各种性状也接近工业生产的要求,可作为良好的发酵菌株应用于发酵工业.
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